| Isolation and ex vivo Expansion of Human Limbal Epithelial Progenitor Cells
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Author:
Date:
2020-09-20
[Abstract] Limbal stem cell transplantation has been used successfully to treat patients with limbal stem cell deficiency all over the world. However, long term clinical results often proved less satisfactory due to the low quality of the graft or inadequate properties of transplanted cells. To enhance the ex vivo expansion of human limbal epithelial stem or progenitor cells (LEPC) by preserving stem cell phenotype and to improve subsequent transplantation efficiency, cell-matrix interactions ex vivo should mimic the condition in vivo. The laminin isoforms preferentially ...
[摘要] [摘要] 角膜缘干细胞移植已成功用于治疗角膜缘干细胞缺乏症的患者。但是，由于移植物质量低或移植细胞特性不足，长期临床结果常常不能令人满意。为了通过保留干细胞表型来增强人角膜缘上皮干细胞或祖细胞（LEPC）的体外扩增，并提高后续移植效率，离体细胞-基质相互作用应模拟体内条件。在角膜缘利基中优先表达的层粘连蛋白同工型可以用作上皮组织工程的培养基质。我们最近发表了LEPC在各种层粘连蛋白同工型上的扩增，并观察到与组织培养板和其他层粘连蛋白同工型相比，层粘连蛋白α5衍生的基质通过保留干/祖细胞表型，支持LEPC的有效扩增。在这里，我们描述了通过重组人层粘连蛋白-511 E8片段（LN-511E8）作为培养底物，通过胶原酶消化和LEPC的有效扩增从尸体角膜缘组织分离LEPC的优化方案。
[背景] 角膜上皮干/祖细胞（LEPC）负责角膜上皮的持续更新，位于高度专业化和复杂的环境中。它包括特定的细胞外基质组分和在支撑角膜缘细胞小生corneo -scleral缘（Schermer 等人，1986; Cotsarelis 。等人，1989; 奥多涅斯。等人，2012 ;梅。等人，2012）。这种干/祖细胞储库的损坏或损伤可导致角膜新生血管形成，慢性炎症和与角膜混浊和视力丧失相关的基质瘢痕形成（Kenyon和Tseng，1989； Sangwan 和Tseng ...
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| Preserve Cultured Cell Cytonemes through a Modified Electron Microscopy Fixation
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] Immunocytochemistry of cultured cells is a common and effective technique for determining compositions and localizations of proteins within cellular structures. However, traditional cultured cell fixation and staining protocols are not effective in preserving cultured cell cytonemes, long specialized filopodia that are dedicated to morphogen transport. As a result, limited mechanistic interrogation has been performed to assess their regulation. We developed a fixation protocol for cultured cells that preserves cytonemes, which allows for immunofluorescent analysis of endogenous and ...
[摘要] 培养细胞的免疫细胞化学是用于确定细胞结构内蛋白质的组成和定位的常用且有效的技术。 然而，传统的培养细胞固定和染色方案不能有效地保存培养的细胞色素，长期专门用于形态发生转运的丝状伪足。 结果，进行了有限的机械审讯以评估其监管。 我们开发了一种用于培养细胞的固定方案，该方案保留了细胞质，允许对内源性和过表达的蛋白质进行免疫荧光分析，这些蛋白质定位于脆弱的细胞结构。
【背景】Cytonemes被分类为薄的（~200nm直径）基于肌动蛋白的丝状伪足，长度超过2μm，可以转运形态发生素（Ramírez-Weber和Kornberg，1999）。这些信号结构首先在发育中的 Drosophila 翼成像盘中进行了详细分类和描述，随后在小鼠，小鸡和斑马鱼模型生物中进行了观察（Ramírez-Weber和Kornberg，1999; Sanders et al。，2013; Stanganello et al。，2015）。在大多数情况下，只有对过表达的荧光标记蛋白进行实时成像才能进行细胞色素检测。由于传统的固定方案未能保存这些脆弱的细丝，因此对培养细胞的细胞色素的检查受到限制。这些并发症一直是决定在发育和组织稳态期间驱动细胞色素形成和功能的细胞机制以及确定这些过程是否在疾病中被破坏的限制因素。
为了克服这些限制，我们开发了一种基于修饰电子显微镜固定剂（MEM-fix）的方案，该方案可以保留培养细胞的细胞质。 ...
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| Hair Follicle Stem Cell Isolation and Expansion
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Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract] Stem cells are widely used for numerous clinical applications including limbal stem cell deficiency. Stem cell derived from the bulge region of the hair follicle have the ability to differentiate into a variety of cell types including interfollicular epidermis, hair follicle structures, sebaceous glands and corneal epithelial cells when provided the appropriate cues. Hair follicle stem cells are being studied as a valuable source of autologous stem cells to treat disease. The protocol described below details the isolation and expansion of these cells for eventual clinical application. We used ...
[摘要] 干细胞被广泛用于许多临床应用，包括角膜缘干细胞缺陷。 当提供适当的提示时，源自毛囊凸出区域的干细胞具有分化成多种细胞类型的能力，包括滤泡间表皮，毛囊结构，皮脂腺和角膜上皮细胞。 正在研究毛囊干细胞作为自体干细胞治疗疾病的宝贵来源。 下面描述的方案详细描述了这些细胞的最终临床应用的分离和扩增。 我们使用双报告小鼠模型来观察这些细胞在角膜缘干细胞缺陷小鼠模型中的分离和最终分化。
【背景】干细胞被广泛用于多种翻译和临床应用。一种这样的临床应用是用于治疗角膜缘干细胞缺陷（LSCD）。当角膜缘干细胞群存在功能障碍或丧失时，LSCD发生，这对于由于先天性或获得性病理而维持健康的眼表非常重要。 LSCD的主要治疗策略是从患者健康眼睛的角膜缘活检组织培养自体上皮细胞片（Pellegrini等人，1997; Shortt等人，2007） 。这种策略的局限性在于它只适用于患有单侧LSCD的患者。那些有双侧LSCD的患者必须依靠免疫相关活体供体或尸体组织的同种异体角膜缘活检。由于全身性免疫抑制治疗的需要和供体组织的有限可用性，治疗成功率降低。一些研究小组一直在研究使用培养的口腔粘膜细胞治疗LSCD并取得了一些成功。然而，这些细胞通常不能表达角膜上皮分化标记角蛋白12（Inatomi等，2006），并且经常导致外周血管新生的发展（Nakamura等人， ，2004; ...
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