| Purification of Rice Stripe Virus
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Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] Although many spherical and rod-shaped plant virus purification protocols are now available, only a few protocols on filamentous plant virus purification have been published. Here, we report a protocol for large-scale purification of Rice stripe virus (RSV) from RSV-infected rice tissues. RSV virions with high infectivity were first precipitated with polyethylene glycol (PEG) followed by pelleting through primary ultracentrifugation, ultracentrifugation in a glycerol cushion and ultracentrifugation in density gradient. The purified RSV virions can not only be viewed as filamentous particles ...
[摘要] [摘要 ] 尽管现在可以使用许多球形和杆状植物病毒的纯化方案，但有关丝状植物病毒纯化的协议却只有少数。在这里，我们提出一个协议水稻的大规模纯化小号牛肚v IRUS 从RSV感染的水稻组织（RSV）。首先用聚乙二醇（PEG）沉淀具有高感染力的RSV 病毒颗粒，然后通过一次超速离心，在甘油垫层中超速离心和密度梯度超速离心沉淀。纯化的RSV 病毒体不仅可以在电子显微镜下观察为丝状颗粒，而且还可以通过昆虫载体直接注入昆虫体内或在送入水稻之前通过膜饲喂获得。
[背景 ] 许多purificatio n，用于球形和棒状病毒协议已被发表（安德烈é 等人，2002; BALKE 。等人，2018） 。这些协议都依赖于化学沉淀或密度梯度离心。但是，丝状病毒的纯化方案目前受到限制。
大米小号肚v 病毒属（RSV）是负链RNA病毒，属于属纤细病毒，订单Bunyavirales 。在许多东亚国家，RSV经常对水稻生产造成严重损害（Whitfield 等，2015； Liu 等，2018）。与生产球状和包膜病毒体的Bunyavirales 顺序中的其他成员不同，RSV 病毒体是丝状的。然而，RSV基因组编码在纯化的RSV 病毒体中未发现的糖蛋白（Toriyama，19 86； Lu 等人，2019）。已知RSV ...
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| Plasma Membrane Preparation from Lilium davidii and Oryza sativa Mature and Germinated Pollen
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Author:
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2017-05-20
[Abstract] Pollen germination is an excellent process to study cell polarity establishment. During this process, the tip-growing pollen tube will start elongating. The plasma membrane as the selectively permeable barrier that separates the inner and outer cell environment plays crucial roles in this process. This protocol described an efficient aqueous polymer two-phase system followed by alkaline solution washing to prepare Lilium davidii or Oryza sativa plasma membrane with high purity.
[摘要] 花粉萌发是研究细胞极性的一个很好的过程。在此过程中，尖端生长的花粉管将开始延长。作为分离内外细胞环境的选择性渗透屏障的质膜在该过程中起关键作用。该方案描述了一种有效的含水聚合物两相体系，接着进行碱性溶液洗涤以制备高纯度的百合百合或水稻质膜。
背景 花粉质膜包含对花粉管生长和受精至关重要的各种蛋白质，例如受体样激酶（Wang等人，2016）和离子通道（Hamilton等人， em>，2015）。分离纯质膜（PM）是综合PM蛋白质组分析的前提。 PM制备主要有四种方法：差速离心，密度梯度离心，制备型自由流动电泳和含水聚合物两相体系。通常，差速离心通常与密度梯度离心合并，以根据其大小，形状和密度分离亚细胞组分。这种技术是快速的，但是由于细胞器密度的重叠，所得的PM产率和纯度都很低（Schindler和Nothwang，2006）。自由流动电泳和水性聚合物两相系统根据其表面性质分离膜囊泡。这两种方法可以富集PM足够纯化蛋白质组学分析（Alexandersson等人，2007）。然而，用于自由流动电泳的仪器操作复杂（Sandelius等人，1986）。相比之下，通过离心可以容易且快速地进行含水聚合物两相体系，使得该方法对PM制备更方便。 ...
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| Purification and TEM of Afp and Its Variants
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Author:
Date:
2014-05-20
[Abstract] The Serratia entomophila antifeeding prophage (Afp), forms a phage-tail-like particle (tailocin) that causes cessation of feeding activity of the New Zealand grass grub, Costelytra zealandica. Here, we describe the more detailed purification protocol for Afp particles and its variants which is based on the procedure described in our original publication (Rybakova et al., 2013). The purification procedure includes inducing Escherichia coli (E. coli) cells harbouring afp genes under arabinose-inducible promoter for 24 h. The cells are ...
[摘要] 噬菌体噬菌体抗原噬菌体（Afp）形成噬菌体尾样颗粒（太古霉素），其导致新西兰草禾本科（Costelytra zealandica）的饲养活性的停止。在这里，我们描述了Afp颗粒及其变体的更详细的纯化方案，其基于我们的原始出版物中描述的程序（Rybakova等人，2013）。纯化程序包括在阿拉伯糖诱导型启动子下诱导含有emp 基因的大肠杆菌（大肠杆菌）细胞24小时。收获细胞，在冰上超声处理，然后进行DNA酶处理和离心。然后将上清液过滤灭菌，并应用于尺寸排阻色谱（SEC）柱。合并含有Afp或其变体的级分并超速离心。除去上清液，将透明沉淀物重悬浮于残余缓冲液中。该程序产生约70％纯的Afp颗粒或其变体。使用透射电子显微镜（TEM）对Afp颗粒进行负染色并可视化。
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