| Multilayered Fabrication Assembly Technique to Engineer a Corneal Stromal Equivalent
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Author:
Date:
2021-03-20
[Abstract] Tissue engineering has emerged as a strategy to combat the donor shortage of human corneas for transplantation. Synthetic corneal substitutes are currently unable to support the normal phenotype of human cells and so decellularized animal corneas have been deployed to more closely provide the topographical and biochemical cues to promote cell attachment and function. Although full thickness decellularized corneas can support corneal cells, the cells are slow to populate the scaffold and density declines from the surface. To avoid these problems, this protocol describes the stacking of ...
[摘要] [摘要]组织工程学已成为一种解决人类角膜移植供体短缺的策略。合成的角膜替代物目前不能支持人类细胞的正常表型，因此已经使用脱细胞的动物角膜来更紧密地提供地形和生化线索以促进细胞附着和功能。尽管全厚度的脱细胞角膜可以支持角膜细胞，但这些细胞填充支架的速度很慢，并且密度从表面降低。为了避免这些问题，该协议描述了脱细胞层的交替层的堆叠 猪角膜片和载有细胞的胶原蛋白水凝胶可产生角膜构建体。通过将猪角膜冷冻切片，用去污剂和核酸酶使它们脱细胞，最后进行空气干燥以储存和易于制造，从而获得了薄片。然后将角膜基质细胞封装在I型胶原溶液中，并在这些薄片之间进行浇铸。该协议提出了一种快速的方法，以确保仅使用组织来源的材料即可在整个构建体中获得高细胞度。
图形摘要：
获得角膜基质等效物的主要过程概述
[背景]角膜失明影响着全球数百万人，治疗主要依赖于人类供体角膜的移植（Gain等人，2016）。由于这些捐赠是稀缺的，因此需要基于生物材料的组织工程学的替代方案。正在开发各种各样的策略和材料来工程化角膜组织，一种有前途的方法是使用脱细胞的动物角膜（Fernández- Pérez和Ahearne ...
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| An ex vivo Approach to Assess Mitochondrial ROS by Flow Cytometry in AAV-tagged Astrocytes in Adult Mice
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Author:
Date:
2020-03-20
[Abstract] Mitochondrial reactive oxygen species (mROS) are naturally produced signalling molecules extremely relevant for understanding both health- and disease-associated biological processes. The study of mROS in the brain is currently underway to decipher their physiopathological roles and contributions in neurological diseases. Recent advances in this field have highlighted the importance of studying mROS signalling and redox biology at the cellular level. Neurons are especially sensitive to the harmful effects of excess mROS while astrocytic mROS have been shown to play a relevant physiological ...
[摘要] [摘要] 线粒体活性氧（mROS ）是天然产生的信号分子，与理解健康和疾病相关的生物过程极为相关。目前正在研究大脑中的mROS ，以了解其在神经疾病中的生理病理作用和贡献。该领域的最新进展凸显了在细胞水平研究mROS 信号传导和氧化还原生物学的重要性。神经元对过量的mROS 的有害作用特别敏感，而星形细胞的mROS对 已经显示出在脑稳态和行为中起相关的生理作用。但是，鉴于大脑的复杂性，研究成年动物中特定细胞类型中mROS的形成在方法上具有挑战性。在这里，我们提出了一种方法来具体评估星形胶质细胞中的mROS 丰度，该方法结合了i ）一种靶向策略，该策略基于在星形胶质细胞（胶质纤维酸性蛋白或GFAP）下表达绿色荧光蛋白（GFP）的腺相关病毒（AAV）载体的使用）启动子，以及ii）使用商业探针通过流式细胞术测量mROS 的强大且广泛扩展的方案。这项工作的意义在于，它允许通过易于使用的技术来选择性研究星形细胞mROS的丰度。
[背景 ] 氧化损伤与许多疾病的病因有关，包括神经退行性疾病，因为大脑是氧化应激以及与年龄相关的变化异常脆弱的组织（Cobley 等，2018; Mattson和Arumugam ...
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| Determination of the Glycolysis and Lipogenesis in Culture of Hepatocytes
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Author:
Date:
2016-11-05
[Abstract] Metabolic flux analyses are needed to provide insights into metabolic regulation that occurs in cells. The current protocol describes fast and reproducible methods for determining glycolysis and de novo lipogenesis of hepatocytes. Primary culture of hepatocytes is an ‘in vitro’ model useful to study liver glucose and lipid metabolism (Denechaud et al., 2016). The protocol is divided in 2 parts. Part I: Glycolysis experiment is assessed using the Seahorse extracellular flux (XF) analyser. Glycolysis is determined via the measurement of the extracellular acidification ...
[摘要] 需要代谢通量分析来提供细胞中发生的代谢调节的见解。目前的协议描述了确定糖酵解和肝细胞脂肪生成的快速和可重复的方法。肝细胞的原代培养是用于研究肝葡萄糖和脂质代谢的"体外"模型（Denechaud等人，2016）。协议分为2部分。第I部分：使用海马细胞外通量（XF）分析仪评估糖酵解实验。糖酵解通过测量培养基的细胞外酸化速率（ECAR）来确定，所述培养基主要来自丙酮酸中葡萄糖转化后乳酸的细胞排泄。第II部分：新生脂肪生成实验测定来自乙酸盐C 14+前体的甘油三酯（TG）中的放射性C 14+掺入。在2小时后，向培养基中补加乙酸盐，提取脂质，并在新合成的TG标记的定量之前通过TLC（薄层色谱）分离。
[背景] 有不同的方法来评估葡萄糖和脂质代谢：代谢物定量，酶活性和代谢组学...我们的协议聚焦于活细胞的代谢通量分析并且不需要代谢组学设施。海马细胞外通量（XF）分析仪，现在存在于很多机构，是通过确定培养基pH值间接测量活细胞间接糖酵解的强大工具。脂肪生成协议不需要大投资，是高度可重复的。也可以使用氚化水确定，其通过脂肪酸合酶引入新鲜合成的脂质中。
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