| Intestinal Enteroid Culture for Human Astroviruses
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Author:
Date:
2020-07-20
[Abstract] Human astroviruses (HAstV) are non-enveloped, positive-sense single stranded RNA viruses that typically cause gastroenteritis in children, the elderly and among immunocompromised individuals. Some HAstV species have also been implicated in neurological diseases. It is important to study these viruses to understand the pathogenesis and develop therapeutics. Here we describe HAstV infection in epithelium-only human intestinal enteroids (HIE) isolated from biopsy-derived intestinal crypts. Although different HAstV clades have been propagated in transformed immortalized cell lines such as A549, ...
[摘要] [摘要] 人类星状病毒（HAstV）是一种非包膜，正向单链RNA病毒，通常会导致儿童，老年人和免疫力低下的人群中的肠胃炎。一些HAstV物种也与神经系统疾病有关。研究这些病毒以了解其发病机理并开发治疗方法非常重要。在这里我们描述HAstV感染 从活检来源的肠隐窝中分离出的仅上皮的人肠小肠类固醇（HIE）。尽管已经在转化的永生化细胞系（例如A549，Caco-2，HEK293T和Huh7.5）中繁殖了不同的HAstV进化枝，但我们选择HIE是因为它们可以更好地模仿人的肠道，因此在生理上更相关。此外，HIE支持所有HAstV进化枝的复制，包括临床样品，因此使HIE成为研究HAstV生物学的有价值的潜在通用模型。
[背景] 人类星状病毒（HAstV）是高度流行的肠病毒，会引起从腹泻到脑炎的广泛感染。无症状，全身和肠道外感染很常见（Madeley和Cosgrove 1975；Bosch 等人，2014；Kolawole 等人，2019）。尽管具有医学重要性，但H AstV 是一些特征最弱的肠病毒。目前，已识别出三组人类AstV：经典HAstV和非经典HAstV-MLB（墨尔本），以及HAstV-VA / ...
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| Intravenous Labeling and Analysis of the Content of Thymic Perivascular Spaces
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Following development in the thymus, T cells are thought to exit into the periphery predominantly through perivascular spaces (PVS). This exit route is used by conventional T cells, and likely also applies to unconventional T cell subsets, such as precursors of CD8αα and TCRγδ intraepithelial lymphocytes, regulatory T cells and natural killer T cells. Additional cell types might also be found in the PVS and initiate interactions with exiting T cells. The exact content of the PVS, and the processes within, are not well studied. To distinguish vascular from resident cells within various tissues ...
[摘要] 在胸腺发育后，T细胞被认为主要通过血管周围间隙（PVS）进入周边。 这种退路由常规T细胞使用，也可能适用于非常规T细胞亚群，例如CD8αα和TCRγδ上皮内淋巴细胞的前体，调节性T细胞和天然杀伤T细胞。 其他细胞类型也可能在PVS中发现并启动与退出T细胞的相互作用。 PVS的确切内容及其内部过程尚未得到充分研究。 为了通过流式细胞术将血管与各种组织中的驻留细胞区分开，静脉内（静脉内）标记正在成为常用方法。 我们最近使用抗CD45.2抗体和磁性富集来进一步评估这种技术，并比较胸腺和血液中的标记和未标记的细胞。 该测定可用于特异性研究胸腺PVS内的造血细胞亚群。
【背景】未成熟的胸腺细胞经历一系列成熟步骤，包括正向和负向选择，其消除了大部分发育中的T细胞。由此产生的成熟T细胞库因此形成朝向更高比例的有益克隆和减少比例的危险自反应克隆。胸腺还产生较少丰富的T细胞亚群，其通常用于维持免疫系统，组织和代谢稳态，包括：TCRγδ细胞，调节性T细胞（Treg），自然杀伤T细胞（NKT），上皮内淋巴细胞（IEL）和粘膜相关不变T（MAIT）细胞。成熟的胸腺细胞准备迁移到外周，上调表达识别鞘氨醇-1磷酸（S1P）的受体（S1PR1）的表达，S1P是血液中高浓度存在的脂质分子。 S1PR1 + T细胞沿着S1P梯度迁移并卷入血管循环中。
胸腺血管周围间隙（PVS）是实质和脉管系统之间的基膜分隔室。它们被认为促进了细胞的运输，特别是从胸腺移出的成熟T细胞（Mori等人，2007; ...
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| Mouse CD8+ T Cell Migration in vitro and CXCR3 Internalization Assays
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Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] Chemokines are molecules that regulate the positioning of cells during homeostasis and inflammation. CXCL10 is an interferon-induced chemokine that attracts cells that express the chemokine receptor CXCR3 on their surface. CXCL10 expression is often induced upon inflammation and guides lymphocytes, such as T and NK cells, into the injured tissues. Notably, CXCL10 binding to CXCR3 induces receptor internalization and, therefore, low CXCR3 levels in cells positive for CXCR3 expression can be indicative of chemokine signaling.
Here, we describe an in vitro method to evaluate ...
[摘要] 趋化因子是调节体内平衡和炎症期间细胞定位的分子。 CXCL10是干扰素诱导的趋化因子，其吸引在其表面上表达趋化因子受体CXCR3的细胞。 CXCL10表达通常在炎症诱导并引导淋巴细胞如T和NK细胞进入受损组织。值得注意的是，CXCL10与CXCR3结合诱导受体内化，因此CXCR3表达阳性细胞中的CXCR3水平降低可能是趋化因子信号传导的指示。
＆nbsp;这里，我们描述体外方法来评估鼠CD8 + T细胞向重组鼠CXCL10迁移的能力;以及暴露于不同剂量的趋化因子后在T细胞表面测量CXCR3表达水平的流式细胞术测定。
背景 趋化因子介导的T细胞运输是稳态和炎症期间的重要过程。活化的CD8 + T细胞表达趋化因子受体，例如CXCR3，允许它们向趋化因子CXCL9,10和11迁移，通常在损伤组织上上调。调节T细胞迁移的分子线索的评估对于了解其功能背后的生物学非常重要，但是在体内运行的复杂机制有时难以去卷积。在这里，我们提供有关体外方法的详细信息，以评估CD8 + T细胞上的趋化因子功能，重点是CXCL10介导的化学吸引和CXCR3内化。我们使用可以容易地在体外扩增和活化的抗原特异性转基因CD8 +细胞，因此提供足够数量的表型相同的淋巴细胞（例如， ...
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