| Extraction of Chloroplast Proteins from Transiently Transformed Nicotiana benthamiana Leaves
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Author:
Date:
2014-09-20
[Abstract] This rapid protocol allows the extraction of chloroplast enriched proteins from Nicotiana benthamiana (N. benthamiana) leaves that were transiently transformed to express an epitope tagged protein of interest. Thus, it can serve as a tool to study the chloroplastidic localization of the protein of interest when it is combined with western-blot analysis.
Agrobacterium-mediated transformation (Agroinfiltration, Romeis et al., 2001) is used to transiently express a protein carrying an epitope tag in tobacco leaves. Here, co-infiltration with an Agrobacterium ...
[摘要] 该快速方案允许从瞬时转化以表达感兴趣的表位标记蛋白的本氏烟草（本氏烟草）叶中提取富含叶绿体的蛋白。因此，当它与Western印迹分析结合时，它可以作为研究目标蛋白质的叶绿体定位的工具。使用土壤杆菌介导的转化（Agroinfiltration，Romeis等人，2001）瞬时表达在烟草叶中携带表位标签的蛋白质。在这里，与土壤传播的小麦花叶病毒携带19K的农杆菌菌株的共浸润抑制转录后基因沉默，并因此增加转化效率（Te等人，2005） 。转化的叶子的叶绿体分离基于Romeis等人（2001）的修改，包括细胞壁和膜的机械破坏，通过过滤去除未破坏的组织，通过Percoll层离心分离完整叶绿体。
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| Axenic Culture of Sclerotinia sclerotiorum and Preparation of Sclerotinia Culture Filtrate Elicitor 1 (SCFE1)-containing Fractions, Triggering Immune Responses in Arabidopsis thaliana
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Author:
Date:
2014-09-05
[Abstract] The necrotrophic white mold fungus Sclerotinia sclerotiorum (S. sclerotiorum) is pathogenic to a broad range of plant species, including the Brassicaceae model plant Arabidopsis thaliana (Boland and Hall, 1994; Bolton et al., 2006). In Arabidopsis thaliana (A. thaliana), the semi-purified proteinaceous S. sclerotinorum elicitor SCFE1 (Sclerotinia culture filtrate elicitor 1) is sensed at the plasma membrane by the receptor-like protein RLP30 and triggers strong immune responses (Zhang et al., 2013), similar to ...
[摘要] 坏死性白霉菌真菌（Sclerotinia sclerotiorum）（核盘菌）对广泛的植物物种（包括十字花科模式植物拟南芥（Arabidopsis thaliana））具有致病性， （Boland和Hall，1994; Bolton等人，2006）。在拟南芥中（thaliana），是半纯化的蛋白质。通过受体样蛋白RLP30在质膜感测核盘菌诱导物SCFE1（核盘菌属培养物滤液诱发物1），并且引发强烈的免疫应答（Zhang等人。，2013），类似于细菌激发剂鞭毛蛋白（Felix等人，1999）。植物防御与SCFE1的诱导是一个工具，以解剖涉及RLP30的信号通路和研究对坏死性真菌的免疫。在这里，我们描述一个简单的协议来生长。菌核。此外，我们提出了一种两步液相色谱法从培养滤液中部分纯化SCFE1的方法（图1A-B）。通过气相色谱法测定植物应激激素乙烯的发射作为生物测定，以在整个纯化程序中监测级分中的激发剂活性（图1C）。
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