| Protocol for Isolation, Stimulation and Functional Profiling of Primary and iPSC-derived Human NK Cells
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Author:
Date:
2020-12-05
[Abstract] Natural killer (NK) cells are innate immune cells, characterized by their cytotoxic capacity, and chemokine and cytokine secretion upon activation. Human NK cells are identified by CD56 expression. Circulating NK cells can be further subdivided into the CD56bright (~10%) and CD56dim NK cell subsets (~90%). NK cell-like cells can also be derived from human induced pluripotent stem cells (iPSC). To study the chemokine and cytokine secretion profile of the distinct heterogenous NK cell subsets, intracellular flow cytometry staining can be performed. However, this assay is challenging when the ...
[摘要] [摘要]天然杀伤（NK）细胞是先天性免疫细胞，其特征在于其细胞毒性能力以及活化后的趋化因子和细胞因子分泌。人NK细胞通过CD56表达鉴定。循环的NK细胞可进一步细分为CD56亮（约10％）和CD56暗NK细胞亚群（约90％）。NK细胞样细胞也可以源自人诱导的多能干细胞（iPSC）。为了研究不同的异源NK细胞亚群的趋化因子和细胞因子分泌概况，可以进行细胞内流式细胞仪染色。然而，当起始原料有限时，该测定法具有挑战性。或者，可以通过Luminex测量上清液中分泌的效应子分子来富集，分选，刺激和功能性分析NK细胞亚群。在这里，我们提供了一种快速直接的方案，用于分离和刺激原代NK细胞或iPSC衍生的NK细胞样细胞，并随后检测分泌的细胞因子和趋化因子，这也适用于少量细胞。
[背景]自然杀伤（NK）细胞是先天免疫系统的一部分，提供第一线防御病毒感染和畸形。在人血中，可以基于CD56和CD16表达鉴定出两个不同的NK细胞群体：CD56明亮的CD16 +/-和CD56暗的CD16 + ...
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| Modeling NOTCH1 driven T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia in Mice
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] T-cell acute lymphoblastic leukemia (T-ALL) is an aggressive hematological malignancy that arises from transformation of T-cell primed hematopoietic progenitors. Although T-ALL is a heterogenous and molecularly complex disease, more than 65% of T-ALL patients carry activating mutations in the NOTCH1 gene. The majority of T-ALL–associated NOTCH1 mutations either disrupt the negative regulatory region, allowing signal activation in the absence of ligand binding, or result in truncation of the C-terminal PEST domain involved in the termination of NOTCH1 signaling by ...
[摘要] [摘要 ] T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）是一种侵袭性血液恶性肿瘤，其起源于T细胞引发的造血祖细胞的转化。尽管T-ALL是一种异质且分子复杂的疾病，但超过65％的T-ALL患者在NOTCH1 基因中带有激活突变。大多数与T-ALL相关的NOTCH1 突变要么破坏负调控区，允许在没有配体结合的情况下激活信号，要么导致蛋白酶体降解终止NOTCH1信号终止所涉及的C末端PEST域被截短。迄今为止，逆转录病毒转导模型在很大程度上依赖于侵袭性截短的变种的过度表达。 NOTCH1 （例如ICN1或ΔE-NOTCH1）可导致信号传导的超生理水平，并且在人类T-ALL中很少见。当前方案描述了小鼠骨髓分离，造血干细胞和祖细胞（HSC）富集，然后逆转录病毒转导的致癌突变体形式的NOTCH1受体（NOTCH1-L1601P-ΔP）的方法，该方法与获功能突变最常见于患者样品中。组成型活性NOTCH1的这种强制表达的标志是胸腺外未成熟T细胞发育的瞬时波，此波在致癌性转化为T-ALL之前。此外，该方法通过允许白血病细胞与微环境之间的串扰来模拟体内白血病的转化和进展，这是基于细胞系的体外研究无法解释的一个方面。因此，HSC转导和移植模型更真实地概括了人类疾病的发展，为进一步的体内和离体功能研究提供了高度全面和通用的工具。
[背景 ] ...
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| Primary Cultures from Human GH-secreting or Clinically Non-functioning Pituitary Adenomas
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] Pituitary adenomas are among the more frequent intracranial tumors usually treated with both surgical and pharmacological–based on somatostatin and dopamine agonists–approaches. Although mostly benign tumors, the occurrence of invasive behaviors is often detected resulting in poorer prognosis. The use of primary cultures from human pituitary adenomas represented a significant advancement in the knowledge of the mechanisms of their development and in the definition of the determinants of their pharmacological sensitivity. Moreover, recent studies identified also in pituitary adenomas putative ...
[摘要] 垂体腺瘤是更常见的颅内肿瘤之一，通常用基于生长抑素和多巴胺激动剂手术的手术和药物治疗。 虽然多为良性肿瘤，但侵入性行为的发生常常被检测到，导致预后较差。 来自人类垂体腺瘤的原代培养物的使用代表了对其发育机制的知识以及其药理敏感性决定因素的定义方面的显着进步。 此外，最近的研究也在垂体腺瘤中发现了假定的肿瘤干细胞，根据目前的假设，它代表了根除大多数恶性肿瘤的真实细胞靶标。 在这个协议中，我们描述了从人垂体腺瘤建立原代培养的程序，以及如何选择，体外扩增和表型鉴定推定的垂体腺瘤干细胞。
【背景】垂体腺瘤是最常见的颅内肿瘤之一（高达15％），横断面研究发现每100,000名居民中约有90例发病，其中绝大多数为30岁以上的成年人。大约10％的未经选择的垂体在尸检时进行了检查（即考虑到之前未诊断为垂体疾病的受试者的垂体）（ ，Molitch，2017）。尽管通常为良性肿瘤，但垂体腺瘤的处理可因与激素分泌过多相关的临床综合征或发展以治疗抗性，高增殖率，快速复发和绒毛外侵袭为特征的侵袭行为而复杂化（Carreno等人，2017）。成年垂体干细胞的持续存在（Florio，2011）导致垂体腺瘤（以及可能的其他良性瘤形成）的发展可以源自具有干细胞特性（主要是自我更新和分化）的肿瘤细胞的亚群能力），正如已经建立的恶性固体和血液肿瘤一样。
最近的实验证据表明，癌症干细胞（CSC）范例也适用于人和小鼠垂体腺瘤（Donangelo等人，2014; ...
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