| Detection of Protein S-nitrosothiols (SNOs) in Plant Samples on Diaminofluorescein (DAF) Gels
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Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] In plant cells, the analysis of protein S-nitrosothiols (SNOs) under physiological and adverse stress conditions is essential to understand the mechanisms of Nitric oxide (NO)-based signaling. We adapted a previously reported protocol for detecting protein SNOs in animal systems (King et al., 2005) for plant samples. Briefly, proteins from plant samples are separated via non-reducing SDS-PAGE, then the NO bound by S-nitrosylated proteins is released using UV light and, finally, the NO is detected using the fluorescent probe DAF-FM (Rodriguez-Ruiz et al., ...
[摘要] 在植物细胞中，生理和不利胁迫条件下的蛋白质S-亚硝基硫醇（SNO）的分析对于了解一氧化氮（NO）的信号传导机制至关重要。 我们调整了以前报告的用于检测动物系统中蛋白质SNO的方法（King等，2005），用于植物样品。 简言之，通过非还原性SDS-PAGE分离来自植物样品的蛋白质，然后使用UV光释放由S-亚硝基化蛋白质结合的NO，最后使用荧光探针DAF-FM检测NO（Rodriguez-Ruiz et 等等，2017）。 因此，本文提出的方法提供了相对快速和经济的方法，可用于比较植物样品中的蛋白质SNOs含量，并提供植物中基于NO的信号传导的洞察。
【背景】一氧化氮（NO）是一种自由基，可与各种生物分子阵列相互作用，包括蛋白质，脂质和核酸。在蛋白质的情况下，最相关的翻译后修饰（PTM）之一是NO基团与存在于肽或蛋白质中的半胱氨酸（Cys）的硫醇（-SH）侧链的共价连接。该修饰产生称为S-亚硝基硫醇（SNO）的家族，其是动物和植物系统中重要的化合物（Foster等人，2003; Lindermayr和Durner，2009; Astier等人，2011; ...
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| Separation of Plant 6-Phosphogluconate Dehydrogenase (6PGDH) Isoforms by Non-denaturing Gel Electrophoresis
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] 6-Phosphogluconate dehydrogenase (6PGDH; EC 1.1.1.44) catalyzes the third and irreversible reaction of the pentose phosphate pathway (PPP). It carries out the oxidative decarboxylation of the 6-phosphogluconate to yield ribulose-5-phosphate, carbon dioxide and NADPH. In higher plants, 6PGDH has several subcellular localizations including cytosol, chloroplast, mitochondria and peroxisomes (Corpas et al., 1998; Krepinsky et al., 2001; Mateos et al., 2009; Fernández-Fernández and Corpas, 2016; Hölscher et al., 2016). Using Arabidopsis thaliana as ...
[摘要] 6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGDH; EC 1.1.1.44）催化戊糖磷酸途径（PPP）的第三次和不可逆反应。它进行6-磷酸葡萄糖酸盐的氧化脱羧，得到核酮糖-5-磷酸，二氧化碳和NADPH。在高等植物中，6PGDH具有几种亚细胞定位，包括细胞质，叶绿体，线粒体和过氧化物酶体（Corpas et al。，1998; Krepinsky等人，2001; Mateos et al。，2009;Fernández-Fernándezand Corpas，2016;Hölscher等人，2016）。使用拟南芥作为植物模型和甜椒（Capsicum annuum L.）作为具有农业兴趣的植物的水果，该方案说明如何制备植物提取物用于分离通过在6％聚丙烯酰胺非变性凝胶上电泳可能的6PGDH同种型。因此，该方法允许检测在拟南芥幼苗中的三种6PGDH同种型和甜椒果实中的两种6PGDH同种型。
【背景】非变性凝胶电泳是一种强大的技术，可以分离天然蛋白质。 它们的移动性取决于蛋白质的大小，形状和净电荷。 在这些分析条件下，蛋白质保留了其活性，并结合特定的染色方法，可以分离潜在同种型的存在。 在超氧化物歧化酶家族的情况下，广泛应用这种方法。 然而，据我们所知，没有多少论文分析植物组织中6PGDH活性的不同同工型的存在（Corpas等人，1998; Mateos等人。 ，2009）。 ...
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| Expression and Purification of the Cas10-Csm Complex from Staphylococci
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Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract] CRISPR-Cas (Clustered regularly interspaced short palindromic repeats-CRISPR-associated proteins) is a class of prokaryotic immune systems that degrade foreign nucleic acids in a sequence-specific manner. These systems rely upon ribonucleoprotein complexes composed of Cas nucleases and small CRISPR RNAs (crRNAs). Staphylococcus epidermidis and Staphylococcus aureus are bacterial residents on human skin that are also leading causes of antibiotic resistant infections (Lowy, 1998; National Nosocomial Infections Surveillance, 2004; Otto, 2009). Many staphylococci possess Type ...
[摘要] CRISPR-Cas（聚集的定期间隔的短回文重复-CRISPR相关蛋白）是一类以序列特异性方式降解外来核酸的原核免疫系统。这些系统依赖于由Cas核酸酶和小型CRISPR RNA（crRNA）组成的核糖核蛋白复合物。表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌是人皮肤上的细菌居民，也是抗生素抗性感染的主要原因（Lowy，1998; National Nosocomial Infection Surveillance，2004; Otto，2009） 。许多葡萄球菌具有III型A CRISPR-Cas系统（Marraffini和Sontheimer，2008; Cao等人，2016），已被证明可预防质粒转移并防止病毒性捕食者（Goldberg这些生物体中，等等，2014; Hatoum-Aslan等人，2014; Samai等人，2015）。因此，在天然葡萄球菌背景中获得对这些系统的机械理解可以导致对影响这些病原体的进化和存活的因素的重要见解。 III-A型CRISPR-Cas系统编码称为Cas10-Csm的五亚单位效应复合物（Hatoum-Aslan等人，2013）。在这里，我们描述了一种用于表达和纯化Cas10-Csm的方法。表皮样背景或异源性S。金黄色葡萄球菌背景。该方法由两步纯化方案组成，包括Ni 2 + - ...
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