| Measurements of Root Colonized Bacteria Species
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Author:
Date:
2021-04-05
[Abstract] Root-associated bacteria are able to influence plant fitness and vigor. A key step in understanding the belowground plant-bacteria interactions is to quantify root colonization by the bacteria of interest. Probably, genetic engineering with fluorescence markers is the most powerful way to monitor bacterial strains in plant. However, this could have some collateral problems and some strains can be challenging to label. In this sense, bacterial inoculation under properly controlled conditions can enable reliable and reproducible quantification of natural bacterial strains. In this protocol, we ...
[摘要] [摘要]根系相关细菌能够影响植物的健康和活力。理解地下植物与细菌相互作用的关键步骤是量化目标细菌的根定植。也许，用荧光标记基因工程是监测植物细菌菌株的最有力的方式，但是这可能有一些担保的问题，有些菌株可被有挑战性的标签。从这个意义上说，在适当控制的条件下接种细菌可以对天然细菌菌株进行可靠且可重复的定量。在此协议中，我们描述了用于定量根相关细菌的详细程序。此方法适用于非侵略性样本处理编 形态鉴定和基于PCR的遗传指纹图谱。这种易于遵循的方案适用于研究在人工培养基或土壤中生长的植物的细菌定植。
[背景] ：植物中天然活与在根际，这是指土壤附着在根的薄层各种土壤细菌。虽然有些根瘤菌对植物没有可观察到的作用，但其他根瘤菌是引起有害作用的病原体或促进植物活力的生长性根瘤菌（PGPR）（Mendes等人，2013; Olanrewaju等人，2019）。细菌病原体或PGPR影响植物生长的能力与其细菌根定殖水平紧密相关。因此，细菌根定殖的研究是了解地下植物与细菌相互作用的重要踏脚石。
可以通过可视化荧光信号来评估细菌菌株的丰度，方法是对其进行修饰以表达编码诸如GFP的荧光蛋白的转基因标记基因（Rochat等，2010; Krzyzanowska等，2012; Saad等，2018）。 ...
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| A Spectrofluorophotometrical Method Based on Fura-2-AM Probe to Determine Cytosolic Ca2+ Level in Pseudomonas syringae Complex Bacterial Cells
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Author:
Date:
2021-03-20
[Abstract] Calcium signaling is an emerging mechanism by which bacteria respond to environmental cues. To measure the intracellular free-calcium concentration in bacterial cells, [Ca2+]i, a simple spectrofluorometric method based on the chemical probe Fura 2-acetoxy methyl ester (Fura 2-AM) is here presented using Pseudomonad bacterial cells. This is an alternative and quantitative method that can be completed in a short period of time with low costs, and it does not require the induction of heterologously expressed protein-based probes like Aequorin. Furthermore, it is possible to verify the properties ...
[摘要] [摘要]钙信号传导是细菌对环境线索作出反应的一种新兴机制。为了测量细菌细胞中细胞内游离钙的浓度，在此使用假单胞菌细菌细胞，提出一种基于化学探针Fura 2-乙酰氧基甲基酯（Fura 2-AM）的简单分光荧光法[Ca 2+ ] i 。这是一种可替代的定量方法，可在短时间内以低成本完成，并且不需要诱导异源表达的基于蛋白质的探针（如水母发光蛋白）。此外，有可能验证参与Ca 2+从细胞外基质进入的膜通道的特性。该方法对于在像原核生物一样的小细胞中测量[Ca 2+ ] i在0.1-39.8 µM范围内特别有价值。
[背景] Ca 2+是一种新兴的细菌细胞内信使，会影响多种细胞过程，例如维持细胞完整性，细胞分裂（Dominguez等人，2015），运动性（Tisa和Alder，1995；Gode-Potratz等人，2010；Cruz等人，2012；Guragain等人，2013； Parker等人，2015；Fishman等人，2018 ），III型分泌物（DeBord等人，2003；Dasgupta等人，2003）。 ，2006; Gode-Potratz等，2010; Fi shman等，2018），基因表达（Dominguez等，2015），群体感应（Werthén和Lundgren，2001），生物膜形成（Patrauchan等,, 2001）。 2005年; ...
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| Molecular Size Analysis of Recombinant Importin-histone Complexes Using Analytical Ultracentrifugation
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Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] Histones constitute the protein components of nucleosomes. Despite their small sizes, histones do not diffuse through the nuclear pore complex. Instead, they are transported to the nucleus by importins, either alone or in complex with histone chaperones. Determining the molecular size of the importin-histone complexes is key to understanding the mechanism of histone transport and also the potential roles of importins as histone chaperones and in the assembly of nucleosomes. Here we report a simple and reproducible sedimentation-velocity based method to determine the molecular sizes of ...
[摘要] [摘要] 组蛋白构成核小体的蛋白质成分。尽管其尺寸很小，但组蛋白不会通过核孔复合物扩散。取而代之的是，它们单独或与组蛋白分子伴侣复合地被重要蛋白转运至细胞核。确定importin-histone复合物的分子大小是理解组蛋白转运机制的关键，也是importins作为组蛋白伴侣和在核小体组装中的潜在作用的关键。在这里，我们报告了一种简单且可重现的沉降速度为基础的方法，该方法使用分析超速离心法来确定importin-histone配合物的分子大小。该方法不使用任何报告子标签或与色谱柱树脂的相互作用，从而分析了天然蛋白质的相互作用。
[背景] 核小体是真核染色质的最基本的结构和功能单元。组蛋白H2A，H2B，H3和H 4是核小体的蛋白质成分。每个核包括147个碱基的DNA wrapp的对编绕Ñ H3-H4四聚体和H2A-H2B二聚体的两个拷贝（Luger的等人，1997年一）。像细胞中的其他蛋白质一样，组蛋白在细胞质中合成。然而，核小体组装在核中。尽管它们的小尺寸（单体是10-15 kDa）的，组蛋白不通过核孔复合物扩散，而是可以单独使用或在复合物与由组蛋白importins伴侣输送要么（约翰逊-SAL IBA 等人，2000 ; Baake 等等人，2001；Mosammaparast 等人，2001，2002a和2002b；Muhlhausser ...
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