| In vitro Histone H3 Cleavage Assay for Yeast and Chicken Liver H3 Protease
|
|
Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Histone proteins are subjected to a wide array of reversible and irreversible post-translational modifications (PTMs) (Bannister and Kouzarides, 2011; Azad and Tomar, 2014). The PTMs on histones are known to regulate chromatin structure and function. Histones are irreversibly modified by proteolytic clipping of their tail domains. The proteolytic clipping of histone tails is continuously attracting interest of researchers in the field of chromatin biology. We can recapitulate H3-clipping by performing in vitro H3 cleavage assay. Here, we are presenting the detailed protocol to ...
[摘要] 组蛋白受到广泛的可逆和不可逆的翻译后修饰（PTM）（Bannister和Kouzarides，2011; Azad和Tomar，2014）。已知组蛋白上的PTM调节染色质结构和功能。组蛋白不可逆地修饰其尾部结构域的蛋白水解剪切。组蛋白尾巴的蛋白水解剪切不断吸引研究人员在染色质生物学领域的兴趣。我们可以通过在体外实施H3切割测定来概括H3-剪切。在这里，我们提供了详细的方案来进行体外实验。
背景 组蛋白H3剪切是染色质修饰和调节最不了解的机制。预期H3剪切将永久性消除可能影响染色质相关事件的核小体的PTM。此外，切割的组蛋白的命运仍在研究之中，并且已经表明，切割的组蛋白可能在染色质的特定区域被再循环，或者它们被靶向降解。有各种各样的报告描述了不同生物中组蛋白H3的体内剪切，而组蛋白H3特异性剪切的体外测定是有限的。我们需要一种有效和稳健的体外实验来鉴定组蛋白特异性蛋白酶。为此，我们提出了一个可用于检查酵母和鸡肝组织蛋白H3蛋白酶的体外组蛋白H3剪切活性的方案。我们已经优化了测定的温度和pH条件。在我们优化的条件下，发现蛋白酶在所有核心组蛋白中特异性切割组蛋白H3。我们在最近的出版物（Chauhan等人，2016年; Chauhan和Tomar，2016年; Azad和Tomar，2016; ...
|
|
|
| ER Microsome Preparation and Subsequent IAA Quantification in Maize Coleoptile and Primary Root Tissue
|
|
Author:
Date:
2016-05-05
[Abstract] Auxin is a major growth hormone in plants and the first plant hormone to be discovered and studied (Darwin and Darwin, 1880). The auxin molecule in plants was first identified as indole-3-acetic acid (IAA) by Kögl et al. (1934). Active research over nearly a decade has shed light on many of the molecular mechanisms of its action but the complexity and redundancy of the auxin biosynthetic network raises questions about control of this system. We have shown that some enzymes involved in the YUCCA-route of auxin biosynthesis are not cytosolic but localised to the endoplasmic reticulum ...
[摘要] 生长素是植物中的主要生长激素和待发现和研究的第一种植物激素（Darwin和Darwin，1880）。植物中的植物生长素分子首先由Kögl等人确定为吲哚-3-乙酸（IAA）。 （1934）。近十年的积极研究揭示了其作用的许多分子机制，但是生长素生物合成网络的复杂性和冗余性提出了对该系统的控制的问题。我们已经显示，参与植物生长素生物合成的YUCCA途径的一些酶不是细胞质的，而是定位于拟南芥中的内质网（ER）（YUCCA4.2）（Kriechbaumer等人。（ Zm TAR1和 Zm SPI）（Kriechbaumer /em>，2015）。这提高了生长素生物合成的亚细胞区室的有趣的可能性。为了显示玉米生长素生物合成确实可以在来自玉米幼苗的微粒体以及胞质细胞部分中发生，我们应用本文所述的方案：从玉米胚芽鞘和原代根组织分离微粒体，使用色氨酸的微粒体和胞浆部分的酶测定（Trp）或吲哚-3-丙酮酸（IPyA）作为底物，并提取并定量生长素IAA。
|
|
|
| Assay of Ornithine Decarboxylase and Spermidine/Spermine N1-acetyltransferase Activities
|
|
Author:
Date:
2014-11-20
[Abstract] The polyamines, spermidine (Spd) and spermine, and their diamine precursor putrescine, are important regulators of various cellular functions, such as proliferation and differentiation. Polyamine homeostasis is tightly regulated on the level of uptake, excretion, biosynthesis, interconversion and terminal catabolism. The rate-controlling enzymes of polyamine biosynthesis and interconversion are ornithine decarboxylase (ODC) and spermidine/spermine N1-acetyltransferase (SSAT), respectively. Here, we describe a protocol to assay ODC (Jänne and Williams-Ashman, 1971) and SSAT (Libby, ...
[摘要] 多胺，亚精胺（精）和精胺及其二胺前体腐胺是各种细胞功能（如增殖和分化）的重要调节剂。 多胺稳态在摄取，排泄，生物合成，相互转化和末端分解代谢的水平上受到严格调节。 多胺生物合成和相互转化的速率控制酶分别是鸟氨酸脱羧酶（ODC）和亚精胺/精胺N 1 - 乙酰基转移酶（SSAT）。 在这里，我们描述了测定细胞或组织样品的ODC（Jänne和Williams-Ashman，1971）和SSAT（Libby，1978）活性的方案。
|
|
|