| An in vitro Co-culture System for the Activation of CD40 by Membrane-presented CD40 Ligand versus Soluble Agonist
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] One fundamental property of the TNR receptor (TNFR) family relates to how ‘signal quality’ (the extent of receptor ligation or cross-linking) influences the outcome of receptor ligation, for instance the induction of death in tumour cells. It is unequivocal that membrane-presented ligand (delivered to target cells via cell-surface presentation by co-culture with ligand-expressing third-party cells) induces a greater extent of carcinoma cell death in vitro in comparison to non-cross-linked agonists (agonistic antibodies and/or recombinant ligands). The CD40 receptor epitomises this ...
[摘要] TNR受体（TNFR）家族的一个基本特性涉及“信号质量”（受体连接或交联的程度）如何影响受体连接的结果，例如肿瘤细胞中的死亡诱导。毫无疑问，膜呈递配体（通过与表达配体的第三方细胞共培养通过细胞表面呈递递送至靶细胞）在体外诱导更大程度的癌细胞死亡非交联激动剂（激动性抗体和/或重组配体）。 CD40受体集中体现了TNF受体 - 配体相互作用的这种基本特性，因为CD40交联的程度决定了细胞命运。膜呈递CD40配体（mCD40L），但不是可溶性激动剂（例如，激动性抗CD40抗体），诱导高水平的促炎细胞因子分泌并导致恶性肿瘤细胞广泛死亡（细胞凋亡）但不是正常的）上皮细胞。在本文中，我们描述了通过mCD40L激活CD40并随后检测细胞凋亡的各种特征（包括细胞膜透化，DNA片段化，半胱天冬酶活化）以及细胞内细胞死亡介质检测的共培养系统（包括衔接蛋白，促凋亡激酶和活性氧，ROS）。
【背景】TNFR及其配体在调节淋巴组织以及上皮（尤其是癌）细胞中的细胞增殖或死亡中的作用已经在广泛研究中，因为它们诱导细胞死亡（主要通过细胞凋亡）的能力代表了有希望的目标。用于癌症治疗。然而，重要的是，当以可溶性对膜结合形式存在时，TNFR激动剂引发细胞死亡的能力存在明显差异。当作为单独治疗施用时，可溶性激动剂通常表现出相对低的细胞毒性效力，而膜呈递的配体似乎是优越的（Albarbar ...
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| Fluorescent Labeling of Rat-tail Collagen for 3D Fluorescence Imaging
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] Rat tail collagen solutions have been used as polymerizable in vitro three-dimensional (3D) extracellular matrix (ECM) gels for single and collective cell migration assays as well as spheroid formation. These 3D hydrogels are a relatively inexpensive, simple to use model system that can mimic the in vivo physical characteristics of numerous tissues within the body, namely the skin. While confocal imaging techniques such as fluorescence reflection and two-photon microscopy are able to visualize collagen fibrils during 3D imaging without fluorescence, other imaging modalities ...
[摘要] 大鼠尾胶原溶液已被用作可聚合的体外三维（3D）细胞外基质（ECM）凝胶，用于单一和集体细胞迁移测定以及球状体形成。 这些3D水凝胶是相对便宜，易于使用的模型系统，其可以模拟体内许多组织（即皮肤）的体内物理特征。 虽然诸如荧光反射和双光子显微镜的共焦成像技术能够在没有荧光的3D成像期间可视化胶原原纤维，但是其他成像模式需要荧光染料直接缀合到胶原。 在这里，我们详细介绍了如何生成用荧光染料标记的3D胶原凝胶。 此外，我们还经历了可重复生成适用于活细胞3D成像技术的明亮胶原水凝胶所需的步骤。
【背景】自20世纪50年代以来，Paul Weiss和Beatrice Garber最初观察到增加血浆浓度（纤维蛋白）对间充质细胞形态的影响（Weiss和Garber，1952），开始研究细胞迁移和细胞与周围微环境的相互作用。在随后的几十年中，生物化学家开始深入研究从鼠尾胶原中纯化提取物，并开始将其用作高度可聚合的3D基质（Fitch et al。，1955; Gross et al。，1955; Chandrakasan et al。，1976）。直到20世纪90年代，3D矩阵才真正对细胞生物学界有用，尤其是研究细胞迁移（Friedl et ...
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| An Image-based Assay for High-throughput Analysis of Cell Proliferation and Cell Death of Adherent Cells
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Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] In this protocol, we describe a method to monitor cell proliferation and death by live-cell imaging of propidium iodide (PI)-stained adherent mammalian cells. PI is widely used to assess cell death. However, it is usually used in end-point assays. Recently, we implemented the use of PI for real-time cell death assessment by automated imaging. Cells are seeded in a 96-well format, and after attachment, the treatments are added directly to the wells together with PI. Thereafter, cells are subjected to automated time-lapse imaging and quantification by computer software. Combined analyses of ...
[摘要] 在该协议中，我们描述了通过碘化丙啶（PI）染色的贴壁哺乳动物细胞的活细胞成像来监测细胞增殖和死亡的方法。 PI广泛用于评估细胞死亡。 但是，它通常用于终点检测。 最近，我们通过自动成像实现了PI的实时细胞死亡评估。 将细胞以96孔形式接种，并且在附着后，将处理与PI一起直接加入到孔中。 之后，通过计算机软件对细胞进行自动延时成像和定量。 相衬和荧光图像的组合分析允许评估对细胞增殖的处理效果以及细胞死亡的程度和动力学。
【背景】多种基于细胞的测定可用于确定细胞死亡，但其中大多数测定包括MTT（溴化3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑鎓）测定，晶蓝染色，和各种基于流式细胞术的方法，都有作为终点分析的限制。最近，我们使用自动荧光成像系统（Essen Bioscience的IncuCyte ZOOM）（Sehgal等人，2017）将碘化丙啶（PI）用于细胞死亡的活细胞评估。通过对相差图像进行组合分析，可以同时检测细胞抑制和细胞毒性效应。这种方法证明是可靠和可重复的，以及非常简单和便宜。在我们最近的出版物中，我们将它用于三种不同的癌细胞系（LNCaP，PC3和MCF7），以有效地确定和比较ER Ca 2 +泵抑制剂毒胡萝卜素各种药物类似物（Tg ）（Sehgal et ...
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