| α-Synuclein Aggregation Monitored by Thioflavin T Fluorescence Assay
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Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] Studying the aggregation of amyloid proteins like α-synuclein in vitro is a convenient and popular tool to gain kinetic insights into aggregation as well as to study factors (e.g., aggregation inhibitors) that influence it. These aggregation assays typically make use of the fluorescence dye Thioflavin T as a sensitive fluorescence reporter of amyloid fibril formation and are conducted in a plate-reader-based format, permitting the simultaneous screening of multiple samples and conditions. However, aggregation assays are generally prone to poor reproducibility due to the ...
[摘要] 研究淀粉样蛋白如α-突触核蛋白体外聚集是一种方便和流行的工具，可以获得聚集的动力学见解以及研究因子（例如，聚集抑制剂） 影响它。 这些聚集测定通常利用荧光染料硫磺素T作为淀粉样蛋白原纤维形成的敏感荧光报告物，并且以基于读板器的形式进行，允许同时筛选多个样品和条件。 然而，由于原纤维成核的随机性质和调节因子的多样性，聚集测定通常倾向于较差的再现性。 在这里，我们提出了一个简单和可重复的协议，以研究基于读板器的测定中α-突触核蛋白的聚集。
【背景】内源性蛋白质与淀粉样原纤维的聚集是一种致病过程，与几种疾病相关，例如，神经退行性疾病如阿尔茨海默病（AD）或帕金森病（PD）以及全身性疾病如AL淀粉样变性（ Knowles et al。，2014）。通过基于硫磺素T荧光的聚集测定，可以在基于板读者的装置中在体外中概括该过程，从而允许根据各种影响因素研究淀粉样蛋白的聚集动力学。
硫磺素T（ThT）是一种荧光染料，最初用于组织学样本中的淀粉样蛋白原纤维染色，于1959年由Vassar和Culling（Vassar和Culling，1959），其在体外检测和定量淀粉样纤维的应用
目前，硫代黄素T的聚集测定主要在荧光板读数器中进行，其中例如，96条件可以同时测试。由于原纤维成核的随机性质和影响蛋白质聚集的多种因素，这些测定法具有较差的重现性。因此，已经采用了增加ThT测定的再现性的策略，例如在测量期间使用井板的轨道摇动以及向孔中添加玻璃珠以改善混合（Giehm和Otzen，2010）。 ...
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| Hydrogen Peroxide Measurement in Arabidopsis Root Tissue Using Amplex Red
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Author:
Date:
2016-11-05
[Abstract] This protocol describes the measurement of hydrogen peroxide (H2O2) content in Arabidopsis root tissue by using the Amplex® Red Hydrogen Peroxide/Peroxidase Assay Kit. When root tissue is disrupted and resuspended in phosphate buffer, H2O2 is released from the cells. The obtained root extracts containing H2O2 can be mixed with a solution containing Amplex® Red reagent (10-acetyl-3,7-dihydrophenoxazine). In the presence of horseradish peroxidase, the Amplex® Red reagent reacts with H2 ...
[摘要] 该方案描述了在拟南芥根组织中通过使用Amplex来测量过氧化氢（H 2 O 2 O 2）含量。 sup>红色过氧化氢/过氧化物酶测定试剂盒。当根组织被破坏并重新悬浮在磷酸盐缓冲液中时，H 2 O 2 O 2从细胞中释放。可以将获得的含有H 2 O 2 O 2的根提取物与含有Amplex Red试剂（10-乙酰基-3,7-二 - 。在辣根过氧化物酶的存在下，Amplex Red试剂与H 2 O 2以1:1的化学计量反应。所得产物是红色荧光化合物试卤灵，其可以通过荧光测定或分光光度法检测。我们的方案是基于Amplex ®红色过氧化氢/过氧化物酶测定试剂盒的手册，并描述了一步一步的程序，详细描述必要的控制和数据分析。我们还包括旨在帮助用户容易地用其自己的样品再现测定的方案，说明和实施例的修改。
[背景] 活性氧（ROS），例如H 2 O 2 O 2可以在该细胞是发育提示或应激条件的结果。在大量，ROS积累可能是有害的，通过造成细胞损伤。然而，增加的ROS产生也可以具有信号传导作用，并且作为控制下游细胞反应的第二信使。在植物中，对于许多非生物胁迫，例如干旱，盐度，温度胁迫和营养缺乏，已经显示ROS的信号传导作用（Mittler，2002; Mittler和Blumwald，2015; Xia等人）。 ，2015）。在我们最近的出版物Le ...
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| Aspergillus terreus Infection of Fruits and Terrein Quantification by HPLC Analysis
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Author:
Date:
2016-06-20
[Abstract] The opportunistic fungal human and plant pathogen Aspergillus terreus (A. terreus) can be isolated from sea water, soil or decaying organic matter such as rotting leaves and fruits. While growing on fruits A. terreus produces secondary metabolites such as terrein, which may ease its penetration into plant tissues. In addition, biological activities of terrein may support competition against other microorganisms. In summary, terrein is a small polyketide that reduces germination of seedlings, induces lesions on fruit surfaces but also shows moderate antifungal ...
[摘要] 机体真菌人和植物病原菌土曲霉（A. terreus）可以从海水，土壤或腐烂的有机物质如腐烂的叶子和果实中分离出来。 当在水果上生长时，A. terreus产生次生代谢物如土曲杆菌，这可以缓解其渗透到植物组织中。 此外，土耳特蛋白的生物活性可能支持与其他微生物的竞争。 总而言之，土豆蛋白是一种减少幼苗发芽的小聚酮，诱发水果表面的病变，但也显示出中等的抗真菌活性。 使用这份手稿，我们提供了一种水果感染方案与土曲霉，随后使用基于HPLC的量化方法测定感染果实的土豆油生产率。
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