| Contemporaneous Measurement of Outer and Inner Membrane Permeability in Gram-negative Bacteria
|
|
Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract] The emergence and rapid spread of multidrug resistance in bacteria have led to the urgent need for novel antibacterial agents. Membrane permeabilization is the mechanism for many antibacterial molecules that are being developed against gram-negative bacteria. Thus, to determine the efficacy of a potential antibacterial molecule, it is important to assess the change in bacterial membrane permeability after treatment. This study describes the protocol for the assays of outer and inner membrane permeability using the fluorescent probes N-phenyl-1-naphthylamine and propidium iodide. Compared with ...
[摘要] [摘要 ] 细菌中多药耐药性的出现和迅速扩散导致对新型抗菌剂的迫切需求。膜通透性是许多针对革兰氏阴性细菌的抗菌分子的机制。因此，为了确定潜在的抗菌分子的功效，重要的是评估治疗后细菌膜通透性的变化。这项研究描述了使用荧光探针N-苯基-1-萘胺和碘化丙啶测定外膜和内膜通透性的方案。与其他实验（例如电子显微镜和最小杀菌浓度的测定）相比，该方法提供了一种更简单，更快速且经济高效的方法来评估抗菌分子的膜通透性和杀菌功效。这项研究提出了一种相对于传统方案的优化方案，该方案是在与抗菌测定相同的培养条件下，将细菌与抗菌分子一起孵育，然后在不含肉汤和抗菌分子的缓冲液中检测荧光探针的信号。此协议可避免的效果养分缺乏对细菌的生理状态和抗菌molecul的干扰ES 朝向的F luorescent探针。因此，该方法可以有效，准确地评估膜的渗透性，并与从其他抗菌测定法（如最小抑菌浓度和时间杀灭曲线测定法）获得的结果相匹配。
[背景 ] ...
|
|
|
| Chase Assay of Protein Stability in Haloferax volcanii
|
|
Author:
Date:
2017-03-20
[Abstract] Highly regulated and targeted protein degradation plays a fundamental role in almost all cellular processes. Determination of the protein half-life by the chase assay serves as a powerful and popular strategy to compare the protein stability and study proteolysis pathways in cells. Here, we describe a chase assay in Haloferax volcanii, a halophilic archaeon as the model organism.
[摘要] 高度调节和靶向的蛋白质降解在几乎所有的细胞过程中发挥重要作用。通过追踪测定法测定蛋白质半衰期是比较蛋白质稳定性和研究细胞中蛋白水解途径的有力和普遍的策略。在这里，我们描述了作为模型生物体的嗜盐古细菌Haloferax volcanii 中的追踪测定。
背景 在真核生物中，泛素蛋白酶体系统在高选择性和靶向性蛋白水解中起主要作用（Glickman and Ciechanover，2002）。最近的证据表明，小型古细菌泛素样修饰蛋白或SAMPs也起到了蛋白酶体破坏的靶向蛋白的作用（Maupin-Furlow，2014; Anjum等人，2015; Fu et al。 。，2016）。体内蛋白质半衰期的测量提供了研究蛋白水解途径的直接途径。环己酰胺追踪和脉冲追踪测定通常用于监测真核生物中靶向蛋白质的降解（Zhou，2004）。前一种方法用于确定放线菌酮抑制平移伸长后所有细胞蛋白的半衰期;而脉冲追踪测定法测量新合成（脉冲标记）蛋白质的周转率，而不干扰正常的细胞生长。与真核系统相比，确定古细菌中一种给定蛋白质半衰期的快速简便方法尚未明确。因此，我们开发了一种方案，用于测量盐爱好的考古Haloferax volcanii的体内蛋白质稳定性。使用翻译抑制剂（茴香霉素）和转录（放线菌素D）来最小化该古细菌中新蛋白质的合成。 ...
|
|
|
| Documentation of floral secretory glands in Pleurothallidinae (Orchidaceae) using Scanning Electron Microscopy (SEM)
|
|
Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] A clear, step by step description of the treatment of orchid flowers, subtribe Pleurothallidinae, with Critical Point Drying for SEM is presented. It shows that a simple, short fixation and dehydration method prior to Critical Point Drying is sufficient to obtain good results.
[摘要] 提出了一个清晰，一步一步描述的兰花花，分类Pleurothallidinae，关键点干燥SEM。 它表明在临界点干燥之前的简单，短暂的固定和脱水方法足以获得良好的结果。
[背景] Pleurothallidinae（兰科）具有相对小的花 在花被部分，特别是萼片和唇部展示各种各样的装饰品。 显然，其中大多数在吸引和逮捕传粉媒介方面发挥重要作用，在大多数情况下，这些传粉媒介被认为是小苍蝇。 然而，如果可观察到的增厚，乳突或毛发实际上是分泌腺，则很难从观察立体显微镜的照片来判断。 扫描电子显微镜（SEM）可以是更详细地探索这些花的有力工具，帮助定位，比较和鉴定这些腺（Karremans等人，2015）。
|
|
|