| Assay for Assessing Mucin Binding to Bacteria and Bacterial Proteins
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Author:
Date:
2021-03-05
[Abstract] Legionella pneumophila, a Gram-negative bacterium and the causative agent of Legionnaires’ disease, exports over 300 effector proteins/virulence factors, through its type II (T2SS) and type IV secretion systems (T4SS). One such T2SS virulence factor, ChiA, not only functions as a chitinase, but also as a novel mucinase, which we believe aids ChiA-dependent virulence during lung infection. Previously published protocols manipulated wild-type L. pneumophila strain 130b and its chiA mutant to express plasmid-encoded GFP. Similarly, earlier studies demonstrated that wheat germ agglutinin ...
[摘要] [摘要]嗜肺军团杆菌是革兰氏阴性细菌，是军团菌病的病原体，通过其II型（T2SS）和IV型分泌系统（T4SS）出口了300多种效应蛋白/毒力因子。一种这样的T2SS毒力因子ChiA不仅起几丁质酶的作用，而且还起新型粘蛋白酶的作用，我们认为它可以在肺部感染期间帮助ChiA依赖性毒力。以前发表的协议操纵野生型肺炎嗜血杆菌130b菌株及其chiA突变体，以表达质粒编码的GFP。同样，较早的研究表明，小麦胚芽凝集素（WGA）可以进行荧光标记，并可以与粘蛋白结合。 在当前方案中，将GFP标记的细菌与II型和III型猪胃粘蛋白孵育，然后用TexasRed标记的WGA进行标记，并通过流式细胞术进行分析，以测量在有或没有HLA的情况下细菌与粘蛋白的结合。内源性ChiA。另外，我们分析了纯化的ChiA与II型和III型猪胃粘蛋白的结合。该方案将细菌和直接蛋白结合到粘蛋白上，并且是第一个使用WGA和流式细胞术分析革兰氏阴性细菌与粘蛋白结合的方法。
图形摘要：
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评估细菌和蛋白质与粘蛋白结合的策略
[背景技术]嗜肺军团菌（LPN ），革兰氏阴性细菌，是军团病，肺炎的严重形式的病原体。L ...
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| Generating Isogenic Deletions (Knockouts) in Francisella tularensis, a Highly-infectious and Fastidious Gram-negative Bacterium
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Author:
Date:
2015-06-20
[Abstract] Generating bacterial gene deletion mutants, also known as knockouts (KOs), is a powerful tool to investigate individual gene functions. However, fastidious bacteria such as Francisella tularensis (F. tularensis) often are difficult to genetically manipulate. Indeed, many different approaches have been tested to generate F. tularensis mutants. First, Tn5-based EZ::TN transposons have been successfully used to generate transposon libraries in F. tularensis (Qin and Mann, 2006; Weiss et al., 2007). However, creating a comprehensive transposon library ...
[摘要] 产生细菌基因缺失突变体，也称为敲除（KO），是研究个别基因功能的有力工具。然而，诸如土拉弗朗西斯氏菌（emosa Francisella tularensis）（土拉弗朗西斯氏菌）之类的顽固细菌通常难以进行遗传操作。实际上，已经测试了许多不同的方法来生成F。 tularensi 的突变体。首先，基于Tn5的EZ :: TN转座子已经成功地用于在F中产生转座子文库。土耳其病（Qin and Mann，2006; Weiss等人，2007）。然而，创建具有饱和突变的综合转座子文库可能是费力的，筛选基因破坏需要高通量测定法，其中可以测量已知的表型，转座子可能不会完全失活目标基因或可能改变下游基因表达。第二，II组内含子（也称为Targetron）已用于灭活F。 （Rodriguez et al。，2008; Rodriguez et al。，2009）。 Targetron通过在质粒编码的RNA和染色体DNA之间形成复合物，随后将II组内含子插入感兴趣的基因而发挥功能。 Targetron的主要优点是它不需要抗生素抗性标记。然而，如转座子所指出的，targetron基因插入可能不能消除所有基因功能或可能影响下游基因表达。第三，同源重组可用于用选择性标记（例如抗生素抗性标记）完全替代染色体靶基因。这种经典的遗传技术已经在许多F中使用。土耳其语研究（Ramakrishnan等人，2008; ...
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