| Isolation and Cultivation of Primary Brain Endothelial Cells from Adult Mice
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] Brain endothelial cells are the major building block of the blood-brain barrier. To study the role of brain endothelial cells in vitro, the isolation of primary cells is of critical value. Here, we describe a protocol in which vessel fragments are isolated from adult mice. After density centrifugation and mild digestion of the fragments, outgrowing endothelial cells are selected by puromycin treatment and grown to confluence within one week.
[摘要] 脑内皮细胞是血脑屏障的主要组成部分。 为了研究脑内皮细胞在体外的作用，原代细胞的分离是临床价值。 在这里，我们描述了一种方案，其中血管片段与成年小鼠分离。 在密度离心和片段的温和消化后，通过嘌呤霉素处理选择出生长的内皮细胞，并在一周内生长至汇合。
【背景】血脑屏障保护大脑免受细胞和物质的不受控制的侵入。 这主要是由脑内皮细胞形成的屏障组成的紧密和粘附连接限制细胞旁运输。
该方案被开发以克服维持其关键特征的小鼠脑内皮细胞系的有限可用性，例如表达足够量的紧密连接蛋白如闭合蛋白，ZO-1或紧密连接蛋白-5以诱导高跨内皮细胞抗性。
此外，从内含基因修饰的小鼠中分离脑内皮细胞可以在体外研究基因特异性功能。
使用这种方法，我们以前补充了体内研究，证明NF-κB信号在脑内皮细胞中维持正常血脑屏障功能的重要性（Ridder等，2015）。
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| A Streamlined Method for the Preparation of Growth Factor-enriched Thermosensitive Hydrogels from Soft Tissue
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Author:
Date:
2017-02-05
[Abstract] Hydrogels are an ideal medium for the expansion of cells in three dimensions. The ability to induce cell expansion and differentiation in a controlled manner is a key goal in tissue engineering. Here we describe a detailed method for producing hydrogels from soft tissues with an emphasis on adipose tissue. In this method, soluble, extractable proteins are recovered from the tissue and stored while the remaining insoluble tissue is processed and solubilised. Once the tissue has been sufficiently solubilised, the extracted proteins are added. The resulting product is a thermosensitive hydrogel ...
[摘要] 水凝胶是三维细胞扩增的理想媒介。以受控方式诱导细胞扩增和分化的能力是组织工程中的关键目标。在这里，我们描述了从软组织生产水凝胶的详细方法，重点是脂肪组织。在该方法中，可溶性可提取蛋白从组织中回收并储存，而剩余的不溶组织被加工和溶解。一旦组织被充分溶解，就加入提取的蛋白质。所得产物是具有代表天然组织的蛋白质的热敏水凝胶。这种方法解决了在使用某些生物材料时遇到的常见问题，例如高脂质含量，DNA污染和找到适当的灭菌方法。尽管本文的重点是脂肪组织，但使用这种方法，我们已经从其他软组织（包括肌肉，肝脏和心脏组织）中产生了水凝胶。
背景 组织工程的主要目标是通过向身体提供具有与目标部位相似性质的支架来产生新的组织。这允许最佳的重塑并且使得能够形成新生内源性组织。在脂肪组织工程领域，来自脂肪组织的生物材料是特别有意义的，因为脂肪组织广泛可用，并且在理论上为脂肪形成诱导提供了最佳可能的环境（Flynn等人，2007; Flynn，2010; Uriel等人，2008; Choi等人，2009; Young等人，2011）。已经确定脂肪细胞分泌脂肪形成因子（Li et al。，1998; Shillabeer等人，1989; Shillabeer等人， ...
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| Isolation and Primary Culture of Various Cell Types from Whole Human Endometrial Biopsies
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] The isolation and primary culture of cells from human endometrial biopsies provides valuable experimental material for reproductive and gynaecological research. Whole endometrial biopsies are collected from consenting women and digested with collagenase and DNase I to dissociate cells from the extracellular matrix. Cell populations are then isolated through culturing, filtering and magnetic separation using cell-surface antigen markers. Here we provide a comprehensive protocol on how to isolate and culture individual cell types from whole endometrial tissues for use in in vitro ...
[摘要] 从人子宫内膜活组织检查中分离和原代培养细胞为生殖和妇科研究提供了有价值的实验材料。从同意的妇女收集完整的子宫内膜活检组织并用胶原酶和DNA酶I消化以从细胞外基质中分离细胞。然后通过使用细胞表面抗原标记物的培养，过滤和磁性分离来分离细胞群。在这里，我们提供了如何从整个子宫内膜组织分离和培养个体细胞类型以用于体外实验的全面方案。
[背景] 人子宫内膜是子宫内层最粘的层。其由柱状上皮和基础基质层组成，其经历循环再生，生长和响应于循环激素的转化。子宫内膜衬里分化为腺分泌表型为囊胚植入和成功怀孕提供了一个好客的环境。在没有怀孕这个层脱落，导致月经。从人子宫内膜活组织检查中分离和培养细胞允许在体外功能评估和与患者结果相关的细胞特征的研究。子宫内膜细胞的分离和培养是研究妇科和产科医学的许多方面的非常宝贵的研究模型，包括不孕，植入失败，复发性流产和月经紊乱。全人子宫内膜活检包含人子宫内膜基质细胞（HESCs），腔和子宫内膜上皮细胞（HEEC），红细胞和免疫细胞的混合群体。 ...
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