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Author:
Date:
2015-06-20
[Abstract] The PCR- based- α- complementation assay is an effective technique to measure the fidelity of polymerases, especially RNA-dependent RNA polymerases (RDRP) and Reverse Transcriptases (RT). It has been successfully employed to determine the fidelity of the poliovirus polymerase 3D-pol (DeStefano, 2010) as well as the human immunodeficiency virus Reverse Transcriptase (HIV RT) (Achuthan et al., 2014). A major advantage of the assay is that since the PCR step is involved, even the low yield of products obtained after two rounds of low yield of RNA synthesis (for RDRP) or reverse ...
[摘要] 基于PCR的α-互补分析是测量聚合酶，特别是RNA依赖性RNA聚合酶（RDRP）和逆转录酶（RT）的保真度的有效技术。它已经成功地用于确定脊髓灰质炎病毒聚合酶3D-pol（DeStefano，2010）以及人类免疫缺陷病毒逆转录酶（HIV RT）的保真度（Achuthan等人，2014）。该测定法的主要优点是，由于涉及PCR步骤，甚至可以使用该测定法测量在两轮低合成RNA合成（对于RDRP）或逆转录（对于RT）后获得的产物的低产率。该测定也模拟逆转录过程，因为进行RNA和DNA指导的RT合成步骤。我们最近使用该测定法显示在生理相关镁浓度下的HIV RT具有与其它逆转录酶相同范围内的准确度（Achuthan等人，2014）。在这里，我们详细描述如何使用引物延伸反应准备插入。然后在基于PCR的α-互补分析中进一步处理制备的插入片段。
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