| Muscle Function Assessment Using a Drosophila Larvae Crawling Assay
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Author:
Date:
2018-07-20
[Abstract] Here we describe a simple method to measure larval muscle contraction and locomotion behavior. The method enables the user to acquire data, without the necessity of using expensive equipment (Rotstein et al., 2018). To measure contraction and locomotion behaviour, single larvae are positioned at the center of a humidified Petri dish. Larval movement is recorded over time using the movie function of a consumer digital camera. Subsequently, videos are analyzed using ImageJ (Rueden et al., 2017) for distance measurements and counting of contractions. Data are represented as box ...
[摘要] 在这里，我们描述了一种测量幼虫肌肉收缩和运动行为的简单方法。 该方法使用户能够获取数据，而无需使用昂贵的设备（Rotstein et al。，2018）。 为了测量收缩和运动行为，将单个幼虫定位在加湿的培养皿的中心。 使用消费者数码相机的电影功能随时间记录幼虫移动。 随后，使用ImageJ（Rueden et al。，2017）分析视频，以进行距离测量和收缩计数。 使用GraphPad Prism（© GraphPad软件）将数据表示为方框或散点图。
【背景】众所周知，尽管存在其他因素，周围细胞外基质（ECM）的组成与适当的器官功能性密切相关。其成分的变化最终可能导致器官功能失常或失败。利用三龄幼虫的肌肉作为模型，我们可以评估单个ECM蛋白浓度对网格柔韧性或强度的影响，以及幼虫运动行为作为读数。一般来说，这也适用于第一龄或第二龄幼虫，但我们决定使用漂浮的三龄幼虫，因为它们的体型较大。对于 Drosophila 幼虫的精确老化，我们参考Demerec（1950）给出的描述。
近年来出现了多种测量黑腹果蝇幼虫爬行的方法。诸如FIM2c（Risse et ...
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| Histone Deubiquitination Assay in Nicotiana benthamiana
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Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Histone modifications are a group of post-translational modifications on histones which can alter chromatin structure and affect gene expression. Histone ubiquitination is a histone modification found in particular on histone H2A and H2B. Histone ubiquitination can be reversed by ubiquitin-specific proteases (UBP). Here, we describe an in vivo assay for histone deubiquitination activity. After infiltrating UBP12 into Nicotiana benthamiana leaves, H2Aub was visualized by immunocytochemistry. Nicotiana benthamiana leaves, which show high agro infiltration efficiency, ...
[摘要] 组蛋白修饰是一组组蛋白翻译后修饰，可以改变染色质结构并影响基因表达。组蛋白泛素化是组蛋白H2A和H2B特异性发现的组蛋白修饰。泛素特异性蛋白酶（UBP）可以逆转组蛋白泛素化。在这里，我们描述了组蛋白去泛素化活性的体内试验。在将UBP12渗入烟草叶片中后，通过免疫细胞化学观察H2Aub。表现出高的农业渗透效率的本氏烟草叶用于瞬时UBP12表达，用于节省劳力和时间的方案。 H2Aub水平降低表明UBP12的组蛋白去泛素化活性。 N的核的清晰可视化。本生叶使得该方法能够通过使用特异性抗体容易地测量体内组蛋白修饰的水平，从而提供强大的蛋白质功能线索。因此，该协议是组蛋白去泛素化活性的体外试验的有力补充。
【背景】组蛋白修饰在调节染色质结构和基因表达中发挥重要作用。 研究最深入的组蛋白修饰包括甲基化，乙酰化，磷酸化，泛素化和sumoylation。 然而，引入或去除特定组蛋白修饰的酶并不总是已知的。 强大的体外试验可以确定组蛋白修饰酶的催化潜能，但是体内试验方法对于确认体外试验的特异性反映抗体的特异性是必要的。 体内活动。 在这里，我们描述了一个灵活的协议来测试植物组织中组蛋白修饰酶的活性。本塞姆氏。 尽管我们使用该方案来测试遍在蛋白特异性蛋白酶（UBP）对泛素化H2A的活性，但它也可以容易地用于其他特异性抗体可用的组蛋白修饰。
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| Differentiation of Human Induced Pluripotent Stem Cells (iPS Cells) and Embryonic Stem Cells (ES Cells) into Dendritic Cell (DC) Subsets
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2017-08-05
[Abstract] Induced pluripotent stem cells (iPS cells) are engineered stem cells, which exhibit properties very similar to embryonic stem cells (ES cells; Takahashi and Yamanaka, 2016). Both iPS cells and ES cells have an extraordinary self-renewal capacity and can differentiate into all cell types of our body, including hematopoietic stem/progenitor cells and dendritic cells (DC) derived thereof. This makes iPS cells particularly well suited for studying molecular mechanisms of diseases, drug discovery and regenerative therapy (Grskovic et al., 2011; Bellin et al., 2012; Robinton and ...
[摘要] 诱导的多能干细胞（iPS细胞）是工程干细胞，其表现出与胚胎干细胞（ES细胞，Takahashi和Yamanaka，2016）非常相似的性质。 iPS细胞和ES细胞都具有非凡的自我更新能力，可以分化成我们身体的所有细胞类型，包括造血干细胞/祖细胞和源自其的树突状细胞（DC）。这使得iPS细胞特别适用于研究疾病，药物发现和再生治疗的分子机制（Grskovic等人，2011; Bellin等人，2012; Robinton和Daley，2012）。
＆NBSP; DC是免疫系统的主要抗原呈递细胞，因此它们是调节和引导免疫应答的关键参与者（Merad等人，2013）。 DC巡逻外周和界面组织（例如，肺，肠和皮肤）以检测入侵的病原体，并且在激活时，它们迁移到淋巴结以激活和引发淋巴细胞。
＆NBSP; DC包含具有功能专门子集的表型异质家族（Schlitzer和Ginhoux，2014）。通常，经典DC（cDC）和浆细胞样DC（pDC）是分别表现出典型的和等离子体细胞样的DC形态。 cDC识别许多病原体并在激活后分泌促炎细胞因子，而pDC专门检测细胞内病原体并分泌I型干扰素（Merad等，2013; Schlitzer和Ginhoux，2014）。在被称为CD141 Clec9a + cDC1和CD1c + ...
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