| In vitro Nitrate Reductase Activity Assay from Arabidopsis Crude Extracts
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] Nitrate reductase (NR) reduces the major plant nitrogen source, NO3-, into NO2-. NR activity can be measured by its final product, nitrite through its absorbance under optimized condition. Here, we present a detailed protocol for measuring relative enzyme activity of NR from Arabidopsis crude extracts. This protocol offers simple procedure and data analysis to compare NR activity of multiple samples.
[摘要] 硝酸还原酶（NR）将主要的植物氮源NO 3 N-2还原为NO 2 - 2。 NR活性可以通过其最终产物，亚硝酸盐在最佳条件下通过其吸光度来测量。 在这里，我们提供了一个详细的协议，用于测量来自拟南芥粗提物的NR的相对酶活性。 该协议提供简单的程序和数据分析来比较多个样品的NR活性。
【背景】氮是植物所需的主要营养素，主要以硝酸盐的形式吸收。硝酸还原酶是高等植物中首次同化氮的酶。植物硝酸还原酶的同型二聚体如下催化硝酸根的NAD（P）H依赖性还原为亚硝酸根：
NO <3> + NADH + H +→NO - + NAD + H 测量NR活性的方法可能是研究影响NR活性的生物因素的有力工具（Park等人，2011）。氮同化影响植物中氨基酸的含量，因此调节NR活性可用于提高某些作物的质量（Croy和Hageman，1970; Dalling和Loyn，1977; Ruan等人，1998） ）。在该协议中，在优化的缓冲液条件下限制时间内亚硝酸盐浓度增加作为可比值获得。亚硫酸盐浓度通过Griess测定法通过其在540nm处的吸光度来测量。简言之，亚硝酸盐与磺胺酸形成重氮盐，然后N-（1-萘基）乙二胺二盐酸盐形成有色偶氮化合物。可以比较这些值以确定样品如何具有不同的NR活性。此外，通过简单的过程可以将这些数值转换为精确增加的亚硝酸盐浓度。 ...
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| In vitro Colorimetric Method to Measure Plant Glutamate Dehydrogenase Enzyme Activity
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Author:
Date:
2015-08-20
[Abstract] Glutamate dehydrogenase (GDH) is an NAD(H) dependent enzyme that catalyzes, in vitro, the reversible amination of glutamate. Here we describe how to determine spectrophotometrically GDH activity monitoring NADH evolution. This protocol is described here for Arabidopsis thaliana (A. thaliana) although it is also valid for other plant species. GDH protein is a hexamer composed, in the case of Arabidopsis, of a combination of GDHα, GDHβ and GDHγ subunits. Every combination of subunits is possible; however, it is still barely known whether different ...
[摘要] 谷氨酸脱氢酶（GDH）是NAD（H）依赖性酶，其在体外催化谷氨酸盐的可逆胺化。在这里我们描述如何确定分光光度法GDH活动监测NADH进化。此协议在这里描述为拟南芥（ A thaliana ），虽然它也适用于其他植物物种。 GDH蛋白是在拟南芥属的情况下由GDHα，GDHβ和GDHγ亚基的组合组成的六聚体。每个亚基的组合是可能的;然而，仍然几乎不知道不同的组合是否影响六聚体的酶性质。在其他物种中，六聚体是GDHα和GDHβ的组合，但不能丢弃其它基因的存在，因为例如在Fontaine等人（2012）中描述了拟南芥中的GDHγ亚基。
谷氨酸盐+ NAD + + H + →2-氧代戊二酸+ NADH + NH4 +
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