| Generation of the Compression-induced Dedifferentiated Adipocytes (CiDAs) Using Hypertonic Medium
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Current methods to obtain mesenchymal stem cells (MSCs) involve sampling, culturing, and expanding of primary MSCs from adipose, bone marrow, and umbilical cord tissues. However, the drawbacks are the limited numbers of total cells in MSC pools, and their decaying stemness during in vitro expansion. As an alternative resource, recent ceiling culture methods allow the generation of dedifferentiated fat cells (DFATs) from mature adipocytes. Nevertheless, this process of spontaneous dedifferentiation of mature adipocytes is laborious and time-consuming. This paper describes a modified protocol ...
[摘要] [摘要]目前的方法，以获得间充质干细胞（MSC）包括采样，培养，和扩大主要由脂肪，骨髓，和脐带组织的MSCs。然而，缺点是在总细胞在MSC池，和它们的衰减干性的数量有限在维生素- [R Ò扩张。作为替代资源，最近的天花板培养方法允许从成熟的脂肪细胞中生成去分化的脂肪细胞（DFAT）。然而，这种成熟脂肪细胞自发去分化的过程既费力又费时。本文描述了一种用于经修改协议在体外通过采用附加的物理刺激，其中脂肪细胞去分化TA KES扩充所述干性相关的优点的Wnt /β-catenin信号。具体来说，该协议利用含聚乙二醇（PEG）的高渗介质引入细胞外物理刺激以获得更高的效率，并引入更简单的脂肪细胞去分化程序。
[背景]脂肪组织由于其丰度大且侵袭性相对较低，因此是间充质干细胞（MSC）最具吸引力的来源之一（Shen等，2011 ；González-Cruz等，2012； Konno等人，2013）。脂肪来源的MSC，即从皮下脂肪组织的基质血管级分中分离，已被证实同时显示多谱系潜能的体外和体内（Anghileri等人，2008;冈萨雷斯。等人，2009;冈萨雷斯-雷伊等等人，2010； Jumabay等人，2010； Mao等人，2017和2019 ；Darnell等人，2018 ...
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| Super-resolution Imaging of the T cell Central Supramolecular Signaling Cluster Using Stimulated Emission Depletion Microscopy
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Author:
Date:
2020-11-05
[Abstract] Supramolecular signaling assemblies are of interest for their unique signaling properties. A µm scale signaling assembly, the central supramolecular signaling cluster (cSMAC), forms at the center interface of T cells activated by antigen presenting cells (APC). The adaptor protein linker for activation of T cells (LAT) is a key cSMAC component. The cSMAC has widely been studied using total internal reflection fluorescence microscopy of CD4+ T cells activated by planar APC substitutes. Here we provide a protocol to image the cSMAC in its cellular context at the interface between a T cell and ...
[摘要] [摘要]超分子信号组装体因其独特的信号传导特性而受到关注。在抗原呈递细胞（APC）激活的T细胞的中心界面处形成一个微米级的信号传导组件，即中央超分子信号簇（cSMAC ）。用于激活T细胞（LAT）的衔接子蛋白接头是关键的cSMAC组件。所述CSMAC已被广泛使用的CD4全内反射荧光显微镜研究+由平面APC替代活化的T细胞。在这里，我们提供了一种协议，可以在T细胞和APC之间的接口在其细胞上下文中成像cSMAC 。超分辨率激发发射耗尽显微镜（STED）用于确定LA T的定位，其活性，磷酸化形式及其整个池的位置。在固定和抗体染色之前，将载有激动剂肽的APC与TCR转基因CD4 + T细胞孵育4.5分钟。固定的细胞对在Leica SP8 AOBS共聚焦激光扫描显微镜上使用100x 1.4 NA物镜成像。LAT聚集在多个超分子复合物中，并确定了它们的数量和大小分布。使用此协议，可以量化在T细胞和APC之间的界面在其细胞环境中的cSMAC属性。
[背景] ...
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| Protocols to Study Declarative Memory Formation in Mice and Humans: Optogenetics and Translational Behavioral Approaches
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Author:
Azza Sellami, Alice Shaam Al Abed, Laurent Brayda-Bruno, Nicole Etchamendy, Stéphane Valério, Marie Oulé, Laura Pantaléon, Valérie Lamothe, Mylène Potier, Katy Bernard, Maritza Jabourian, Cyril Herry, Nicole Mons and Aline Marighetto,
Date:
2018-06-20
[Abstract] Declarative memory formation depends on the hippocampus and declines in aging. Two functions of the hippocampus, temporal binding and relational organization (Rawlins and Tsaltas, 1983; Eichenbaum et al., 1992; Cohen et al., 1997), are known to decline in aging (Leal and Yassa, 2015). However, in the literature distinct procedures have been used to study these two functions. Here, we describe the experimental procedures used to investigate how these two processes are related in the formation of declarative memory and how they are compromised in aging (Sellami et al., ...
[摘要] 陈述性记忆的形成取决于海马体和老化程度的下降。已知海马，时间结合和关系组织的两种功能（Rawlins和Tsaltas，1983; Eichenbaum等人，1992; Cohen等人，1997），已知老龄化下降（Leal和Yassa，2015）。但是，在文献中已经使用不同的程序来研究这两个功能。在这里，我们描述了用于研究这两个过程如何与陈述性记忆的形成以及它们如何在衰老中受到损害有关的实验程序（Sellami et。，2017）。首先，我们使用单一试验性学习程序研究了时间绑定：追踪恐惧条件反射。这是经典的巴甫洛夫条件需要时间约束，因为短暂的时间间隔将条件刺激（CS）和无条件刺激（US）呈现分开。我们将追踪恐惧条件程序与光遗传学方法相结合，并且我们表明时间依赖性依赖于背侧（d）CA1活性在时间间隙上的依赖性。然后，我们研究了时间绑定和关系组织之间在声明性记忆形成中的相互作用，这种相互作用使用了小鼠中的两阶段径向迷宫任务及其在人类中的虚拟类比。行为过程包括一个初始学习阶段，在这个阶段中，受试者获得每个手臂持续的奖励/无奖赏价值，然后是测试阶段，其中武器中的奖励突发事件保持不变，但武器重新组合以评估灵活性，陈述性记忆。我们证明了dCA1依赖的时间结合对于记忆的关系组织的发展是必需的，这允许灵活的陈述记忆表达。此外，在衰老过程中，陈述性记忆的退化是由于时间约束能力的减少而阻碍了关系组织。 ...
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