| Isolation, Culture and Differentiation of Adult Hippocampal Precursor Cells
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] There are two neurogenic niches in the adult mammalian brain: the subventricular zone of the lateral ventricle and the subgranular zone of the hippocampal dentate gyrus. Cells from these areas can be isolated and maintained in vitro, using two different culture systems to assess their potential regarding proliferation and differentiation in a reductionist model. While the neurosphere assay is primarily performed to directly study the proliferative and differentiation potential of cells in individual brains, the monolayer culture allows single cell analysis in a rather homogeneous ...
[摘要] 成年哺乳动物脑中有两个神经生态位：侧脑室下脑室区和海马齿状回颗粒下区。 来自这些区域的细胞可以在体外分离和维持，使用两种不同的培养系统评估它们在还原模型中的增殖和分化的潜力。 虽然神经球测定主要是为了直接研究个体脑中细胞的增殖和分化潜能，单层培养允许在相当均匀的细胞群中进行单细胞分析。 在这里，我们描述了两个系统中的神经前体细胞的分离，培养方法和分化。
【背景】在哺乳动物脑中，成人神经干细胞存在于两个主要神经生态位中，即海马齿状回（DG）的下颗粒区（SGZ）和室下区（SVZ）的侧脑室，其允许新生神经元成人的大脑。来自神经生态位的神经前体细胞可以在体外分离和培养以模拟细胞过程，尤其是增殖和分化。两种标准培养系统，贴壁单层培养（Palmer等人，1995; Ray等人，1995）和神经球测定（Reynolds和Weiss，1992和1996 ）在20世纪90年代被引入，代表了在体外研究神经祖细胞生物学的有价值的工具。
根据研究问题，每个系统都有其优点和缺点，在选择其中一种或另一种培养方法之前应该仔细考虑。在贴壁单层培养中，细胞生长相当孤立，形成更均匀的培养物。单层允许直接调查和监测单细胞水平的神经前体细胞。受控条件下的形态，增殖和分化等特征可以很容易地分析和可视化。然而，与神经球培养物相比，以单层培养的细胞代表更复杂的模型，因为细胞通常以更少的通常存在于细胞壁中的细胞 ...
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| Isolation and Purification of Schwann Cells from Spinal Nerves of Neonatal Rat
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Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract] Primary cultured Schwann cells (SCs) are widely used in the investigation of the biology of SC and are important seed cells for neural tissue engineering. Here, we describe a novel protocol for harvesting primary cultured SCs from neonatal Sprague-Dawley (SD) rats. In the present protocol, dissociated SCs are isolated from the spinal nerves of neonatal rats and purified by the treatment of cytosine arabinoside (AraC).
[摘要] 原代培养的雪旺氏细胞（SCs）广泛用于SC的生物学研究，是神经组织工程的重要种子细胞。 在这里，我们描述了从新生Sprague-Dawley（SD）大鼠中收获原代培养的SC的新方案。 在本方案中，解离的SCs从新生大鼠的脊神经中分离并通过治疗阿糖胞苷（AraC）进行纯化。
【背景】SC是周围神经系统（PNS）的神经胶质细胞。主要SCs的分离和纯化是研究SC生物学的关键步骤。此外，纯化的原代培养的SC是用于神经组织工程的重要种子细胞。迄今为止，已经基于Brockes（Brockes等人，1979）的方法报道了培养SC的各种方法。通过报道的方法，坐骨神经主要用于SC隔离，因为它们尺寸大并且可以容易地获得。然而，坐骨神经的SC容易被成纤维细胞污染，因为结缔组织难以清除。特别是神经管和神经束是成纤维细胞的主要来源。没有特殊处理，污染的成纤维细胞比SCs快得多，并且将很快成为培养物中主要的细胞。在过去几十年中，已经开发出许多用于从污染成纤维细胞中分离SC的纯化方法。这些纯化方法的细节包括单一或组合的抗有丝分裂处理（Wood，1976），抗体介导的细胞溶解（Brockes等人，1979），免疫选择（Assouline等人，，1983; ...
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| Protease Activity Assay in Fly Intestines
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Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] The intestine is a central organ required for the digestion of food, the absorption of nutrients and for fighting against aggressors ingested along with the food. Impairment of gut physiology following mucosal damages impacts its digestive capacities that consequently will affect growth, wellbeing or even survival of the individual. Hence, the assessment of intestinal functions encompasses, among others, the monitoring of its integrity, its cellular renewing, its immune defenses, the production of enteroendocrine hormones and its digestive capacities. Here, we describe in detail how to assess ...
[摘要] 肠是消化食物所需的中枢器官，吸收营养物质，并与食物一起摄入的侵略者作斗争。 粘膜损伤后的肠道生理损伤影响其消化能力，从而影响个体的生长，健康甚至生存。 因此，肠功能的评估包括监测其完整性，细胞更新，免疫防御，肠内分泌激素的产生及其消化能力。 在这里，我们详细描述如何评估分泌在成年果蝇的肠腔中的蛋白酶的活性。 这种方法也可以用于幼虫肠。 本协议由“蛋白酶荧光检测试剂盒”（产品代码PF0100）中提出的Sigma-Aldrich公司的方案进行了改进和改进。
【背景】肠道受到诸如斋戒，禁食，化学物质，病原体，损伤等诸多压力的影响。肠道能够通过保持其体内平衡的生理平衡来克服这种压力。为了感知进入的压力并产生适应性的维持肠功能的答案，肠已经开发出强健和保守的机制，如局部先天免疫防御和组织再生（Royet和Charroux，2013; Bonfini等，2016）。然而，在某些情况下，肠道稳态的维持可能受到影响。例如，在老化期间，随着许多未成熟或分化不良的细胞的存在，组织稳态维持总体下降（Jasper，2015; ...
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