| Quantifying Podocytes and Parietal Epithelial Cells in Human Urine Using Liquid-based Cytology and WT1 Immunoenzyme Staining
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Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] In glomerular disease, podocytes and parietal epithelial cells (PECs) are shed in the urine. Therefore, urinary podocytes and PECs are noninvasive biomarkers of glomerular disease. The purpose of this protocol is to employ immunocytochemistry to detect podocytes and PECs, using the WT1 antibody on liquid-based cytology slides.
[摘要] 在肾小球疾病中，足细胞和顶壁上皮细胞（PEC）在尿中脱落。 因此，尿足细胞和PECs是肾小球疾病的非侵入性生物标志物。 该协议的目的是使用免疫细胞化学来检测足细胞和PEC，在液基细胞学载玻片上使用WT1抗体。
【背景】足细胞排列在肾小球毛细血管的外部，因此面对鲍曼氏囊和初级尿。在肾小球损伤中，足细胞可能从肾小球基底膜脱落。足细胞的脱落及其在尿液中的脱落与肾小球疾病和月牙形成的进展有关。顶壁上皮细胞（PECs）覆盖鲍曼囊的内部。与足细胞类似，已经报道了在活动性肾小球疾病期间PEC对WT1呈阳性，增殖并在尿中脱落（Zhang等人，2012; Fujita等人 >，2017）。
先前的研究已经显示了尿足细胞和PECs的数量与各种类型的肾小球疾病之间的关系（Hara等人，1998; Nakamura等人，2000; Achenbach ，2008）。上述引用的研究使用常规方法（直接涂片和细胞离心涂片）来制备尿样。然而，这些常规方法具有常见问题，包括风干效应和在细胞离心和固定过程期间显着细胞损失的可能性。另外，传统方法的标准化和定量评估是困难的。虽然以前大多数研究使用免疫荧光染色与podocalyxin抗体，但由于特异性抗原和荧光显微镜的要求，这种方法在中小医院很难实现。
有用的尿生物标志物检测应该容易实施，并且对标准化样品制备和免疫细胞化学的要求最低。因此，我们设计了一种通过结合液基细胞学，WT1抗体和免疫酶染色来检测足细胞和PEC的方法。由于其更好的细胞保存和更高的细胞回收率，SurePath ...
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| Combination of Fluorescent in situ Hybridization (FISH) and Immunofluorescence Imaging for Detection of Cytokine Expression in Microglia/Macrophage Cells
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Microglia and macrophage cells are the primary producers of cytokines in response to neuroinflammatory processes. But these cytokines are also produced by other glial cells, endothelial cells, and neurons. It is essential to identify the cells that produce these cytokines to target their different levels of activation. We used dual RNAscope® fluorescence in situ hybridization (FISH) and immunohistochemistry (IHC) techniques to visualize the mRNA expression pattern of pro- and anti-inflammatory cytokines in microglia/macrophages cells. Using these methods, we can associate ...
[摘要] 小神经胶质细胞和巨噬细胞是响应神经炎症过程的细胞因子的主要生产者。但是这些细胞因子也是由其他神经胶质细胞，内皮细胞和神经元产生的。鉴定产生这些细胞因子的细胞以靶向其不同水平的活化是至关重要的。我们使用双RNAscope荧光原位杂交（FISH）和免疫组织化学（IHC）技术来观察小胶质细胞/巨噬细胞中促炎细胞因子和抗炎细胞因子的mRNA表达模式细胞。使用这些方法，我们可以联合一个mRNA与特定的细胞类型时，通过免疫荧光与不同的细胞标志物结合。来自RNAscope探针的结果IL-1β，TNFα，TGFβ，IL-10或Arg1显示与小胶质细胞/巨噬细胞抗体的共定位。这些靶标探针显示出足够的灵敏度和特异性来检测mRNA表达。新的FISH检测技术结合免疫组化技术将有助于共同确定蛋白质和mRNA的定位，以及提供可靠的mRNA表达水平的量化。
【背景】mRNA原位杂交技术是一种有用的工具，其允许以细胞依赖性方式特异性和选择性标记脑切片中的RNA序列（Grabinski等人，2015 ...
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| Analysis of Starch Synthase Activities in Wheat Grains using Native-PAGE
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Author:
Date:
2016-01-20
[Abstract] Starch synthases are one class of key enzymes involving in the synthesis of cereal starch, which transfer glucose from ADP-glucose to the non-reducing end of pre-existing α-(1-4)-liked glucosyl chains of amylopectin. This protocol is highly reproducible for assaying activities for starch synthase I and IIIa in wheat and barley endosperm at qualitative level and quantitative level. The protocol includes separating proteins isolated from developing endosperm with native-PAGE containing glycogen from oyster, incubating protein gels with ADP-glucose solution, and staining gels with iodine ...
[摘要] 淀粉合酶是涉及谷物淀粉合成的一类关键酶，其将葡萄糖从ADP-葡萄糖转移到预先存在的支链淀粉的α-（1-4） - 葡萄糖基链的非还原端。 这个协议是高度可重复的测定淀粉合成酶I和IIIa在小麦和大麦胚乳的定性水平和定量水平的活动。 该方案包括从发育的胚乳分离的蛋白质与来自牡蛎的含有糖原的天然PAGE，用ADP-葡萄糖溶液孵育蛋白质凝胶，并用碘溶液染色凝胶。 该方法允许研究人员比较淀粉合酶活性的水平或变化。
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