| Differentiation of Myeloid-derived Suppressor Cells from Murine Bone Marrow and Their Co-culture with Splenic Dendritic Cells
|
|
Author:
Date:
2017-09-20
[Abstract] Myeloid-derived suppressor cells (MDSCs) possess the ability to suppress the immune response, and to amplify the regulatory properties of other immune cells, i.e., dendritic cells. Here we describe a protocol in which MDSCs were differentiated from murine bone marrow cells, and CD11c+ dendritic cells were purified from murine spleens. MDSCs and CD11c dendritic cells can be co-cultured and the immunoregulatory phenotype of the MDSCs-conditioned dendritic cells could be assessed by means of a specific functional in vivo experiment, i.e., a skin test as a ...
[摘要] 骨髓来源的抑制细胞（MDSCs）具有抑制免疫应答的能力，并扩增其他免疫细胞即树突状细胞的调节特性。 在这里，我们描述了MDSC与鼠骨髓细胞分化的方案，并且从鼠脾中纯化CD11c +树突状细胞。 可以共培养MDSC和CD11c树突状细胞，并且可以通过特定的功能体内实验来评估MDSCs条件树突细胞的免疫调节表型，即皮肤试验作为延迟型超敏反应的量度 抗免疫原性较差的抗原。
【背景】骨髓来源的抑制细胞（MDSCs）是由早期分化阶段的巨噬细胞，粒细胞，树突状细胞和骨髓细胞的前体组成的骨髓细胞组（Youn等人，2008），其在肿瘤的淋巴组织中大量积累感染性小鼠以及感染性疾病，败血症和创伤的小鼠。这些细胞的主要特征是它们以Ag特异性和/或非特异性方式抑制T细胞应答的能力。这些细胞现在被认为是负责肿瘤相关免疫缺陷的主要细胞类型之一;涉及MDSC介导的免疫抑制的主要因素包括Arg1的高表达（Marvel和Gabrilovich，2015）。精氨酸酶1（Arg1）和吲哚胺2,3-双加氧酶1（IDO1）分别是催化L-精氨酸（L-Arg）和L-色氨酸（L-Trp）降解的免疫调节酶，导致局部氨基酸剥夺。此外，与Arg1不同，IDO1在树突细胞（DC）中也具有非酶信号传导活性（Mondanelli等，2017）。除了其固有的免疫抑制活性外，MDSC还可能扩增其他免疫细胞的调节特性，特别是在肿瘤微环境中。虽然建立了MDSC-巨噬细胞相互作用的一些机制（Ugel等，2015），MDSCs和DCs之间的串扰仍然不清楚（Ostrand-Rosenberg等，2012）;为弥补这一差距，我们已经制定了该方案，并且我们证明了Arg1 ...
|
|
|
| Isolation of Murine Alveolar Type II Epithelial Cells
|
|
Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] We have optimized a protocol for isolation of alveolar type II epithelial cells from mouse lung. Lung cell suspensions are prepared by intratracheal instillation of dispase and agarose followed by mechanical disaggregation of the lungs. Alveolar type II epithelial cells are purified from these lung cell suspensions through magnetic-based negative selection using a Biotin-antibody, Streptavidin-MicroBeads system. The purified alveolar type II epithelial cells can be cultured and maintained on fibronectin-coated plates in DMEM with 10% FBS. This protocol enables specific investigation of ...
[摘要] 我们优化了从小鼠肺分离肺泡II型上皮细胞的方案。通过气管内滴注分泌酶和琼脂糖，然后机械解聚肺来制备肺细胞悬浮液。通过使用生物素抗体Streptavidin-MicroBeads系统的磁性阴性选择，从这些肺细胞悬液中纯化肺泡II型上皮细胞。可以将纯化的肺泡II型上皮细胞培养并维持在含有10％FBS的DMEM中的纤连蛋白包被的平板上。该方案能够在分子和细胞水平上对肺泡II型上皮细胞进行特异性研究，并提供了一种重要的工具，用于在体外研究肺发病机制的机制。
背景 肺泡II型上皮细胞在肺泡完整性维持，表面活性蛋白合成和分泌中起关键作用，并防止细菌和病毒的肺部感染。最近使用小鼠肺癌模型的研究已经证明，肺泡II型上皮细胞是由化学致癌物质和致癌突变诱导的腺瘤/腺癌的关键细胞（Qu 等人，2015; Zhou > et al。，2015和2017）。为了进一步扩大我们对肺泡II型上皮细胞在体内肺发病机制中的作用的理解，需要分离肺泡II型上皮细胞以允许体外精确的机理分析， EM>。基于先前的研究（Corti等人，1996; Rice等人，2002），在我们的实验室中使用了一种修饰的方法来分离高度纯化的，可行的和可培养的来自小鼠的肺泡II型上皮细胞（Zhou等人，2015; Sun等人，2016）。
|
|
|
| Isolation of THY1+ Undifferentiated Spermatogonia from Mouse Postnatal Testes Using Magnetic-activated Cell Sorting (MACS)
|
|
Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] In mammals, homeostasis of many tissues rely on a subpopulation of cells, referred to as stem cells, to sustain an appropriate number of undifferentiated and differentiated cells. Spermatogonial stem cells (SSCs) provide the fundamental cellular source for spermatogenesis and are responsible for the lifelong maintenance of the germline pool in testes throughout the reproductive lifespan of males. To gain insight into germline stem cell biology and develop strategies for infertility treatment, several germ cell isolation methods have been reported in order to acquire good quality and quantity ...
[摘要] 在哺乳动物中，许多组织的体内平衡依赖于称为干细胞的细胞亚群，以维持适量的未分化细胞和分化细胞。精原细胞干细胞（SSC）为精子发生提供了基本的细胞来源，并且负责终生维持雄性生殖期间睾丸中的种系池。为了获得对种系干细胞生物学的了解并制定不孕症治疗策略，已经报道了几种生殖细胞分离方法，以获得良好质量和数量的未分化精原细胞。其中，磁激活细胞分选（MACS）是一种有效的细胞分离方法，其需要较少的时间和较少的初始细胞数以使用抗原 - 抗体反应来获得富集的细胞群体。胸腺细胞抗原1（THY1，CD90.2）被认为是小鼠新生儿和成年睾丸中未分化精原细胞的表面标志物。在这里，我们描述了一个用于分离来自小鼠睾丸的一周龄THY1 + 细胞和四周龄THY1 + 细胞的方案。分离过程包括三个步骤：睾丸收集和单细胞悬浮，使用生物素缀合的抗THY1抗体的细胞标记和磁性细胞分离。注意，这种隔离方案应在五小时内完成，以最大限度地提高活细胞的质量和数量。
背景 在几个成人组织中观察到活性和静止干细胞的共存。静止，自我更新和分化之间的充分平衡对于维持适当数量的未分化干细胞是必要的，并且避免过早的干细胞耗尽许多组织的体内平衡（Tseng等人，2015; Wabik和Jones，2015; ...
|
|
|