| Isolation of Primary Human Skeletal Muscle Cells
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Author:
Date:
2017-11-05
[Abstract] Primary myoblast culture is a valuable tool in research of muscle disease, pathophysiology, and pharmacology. This protocol describes techniques for dissociation of cells from human skeletal muscle biopsies and enrichment for a highly myogenic population by fluorescence-activated cell sorting (FACS). We also describe methods for assessing myogenicity and population expansion for subsequent in vitro study.
[摘要] 原代成肌细胞培养是研究肌肉疾病，病理生理学和药理学的有用工具。 该协议描述了通过荧光激活细胞分选（FACS）从人类骨骼肌活检中分离细胞并富集高度肌原细胞的技术。 我们还描述了用于评估随后的体外研究中肌原性和群体扩张的方法。
【背景】来自肌肉活组织检查的原代人成肌细胞是模拟体外人体肌肉疾病的有价值的资源。成肌细胞增殖，分化和融合的改变是许多神经肌肉疾病所共有的特征，并且可以用于测定基于细胞的和药理学的治疗。人类骨骼肌活组织检查，尤其是那些受疾病影响的人，通常含有大量的非肌原细胞，如脂肪细胞和成纤维细胞。因此，纯化肌原细胞进行骨骼肌发育和疾病的体外研究是非常重要的。肌肉疾病的早期研究涉及使用组织外植体或未纯化的分离细胞（Geiger和Garvin，1957; Herrmann等人，1960; Goyle等人，1967; Bishop 1971年），后来，Blau和Webster引入了一种预先电镀技术去除成纤维细胞（Blau and ...
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| Isolation and Culture of Human CD133+ Non-adherent Endothelial Forming Cells
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Author:
Date:
2016-04-05
[Abstract] Circulating endothelial progenitor cells (EPCs) have been the focus of many clinical trials due to their roles in revascularisation following ischemic events such as acute myocardial infarction as well as their contribution to vascular repair during organ transplantation. Research on EPCs has been controversial due to the lack of distinct markers expressed at the cell surface and varying methods for isolation and culture have resulted in the identification of a multitude of cell types, with differing phenotype and function, all falling under the label of “EPCs”. The most widely documented ...
[摘要] 循环内皮祖细胞（EPCs）已经成为许多临床试验的焦点，因为它们在缺血事件例如急性心肌梗死后的血管再形成中的作用以及它们在器官移植期间对血管修复的贡献。由于缺乏在细胞表面表达的不同标记物，EPCs的研究已经引起争议，并且用于分离和培养的不同方法导致鉴定了具有不同表型和功能的多种细胞类型，所有这些都属于" EPCs"。分离用于细胞治疗的最广泛记载的EPCs本质上是粘附的，缺乏祖细胞标志物例如CD133，因此不太可能代表真正的循环EPC，所述细胞响应于血管损伤而动员。
我们最近发布了非粘附内皮形成细胞（naEFCs）群体的分离和广泛表征（Appleby等人，2012）（图1）。这些细胞与成熟内皮细胞标记（VEGFR2，CD144和CD31）一起表达祖细胞标记（CD133，CD34，CD117，CD90和CD38）。这些细胞还表达低水平的CD45，但不表达将其与"早期"EPC区分开的淋巴标志物（CD3，CD4，CD8）或骨髓标志物（CD11b和CD14），"晚期生长EPC"[最近称为内皮细胞集落形成细胞（ECFCs）]以及成熟内皮细胞（ECs）。图2A例示了naEFC的表面表达谱。功能研究证明这些naEFC（i）结合于玻璃体凝集素（图2A），（ii）显示乙酰化低密度脂蛋白摄取，（iii）增加血管细胞粘附分子（VCAM-1）响应于肿瘤坏死因子的表达和（iv）与成熟EC的共培养增加了在三维体外基质中的管，小管分支和环的数目。更重要的是，放置在体内的naEFC产生了包含由表达CD144的人EC内衬的脉管系统的新腔，并且有助于科学知识的各种进步（Appleby等人，2012; ...
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| Measurement of Cytokines
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Author:
Date:
2012-11-20
[Abstract] This protocol allows to measure the levels cytokines - such as VEGFs, CXCLs cytokines, PDGF or FGF - from fresh samples but also frozen tumors. The advantage of this method is to use very few micrograms of biological material and the protocol is carried out quickly.
[摘要] 该方案允许测量来自新鲜样品而且冷冻肿瘤的细胞因子如VEGF，CXCLs细胞因子，PDGF或FGF的水平。 该方法的优点是使用非常少的微克生物材料，并且该方案快速进行。
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