| Small Molecule-Based Retinal Differentiation of Human Embryonic Stem Cells and Induced Pluripotent Stem Cells
|
|
Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract] Retinal degeneration leads to loss of light-sensing photoreceptors eventually resulting in vision impairment and impose a heavy burden on both patients and the society. Currently available treatment options are very limited and mainly palliative. Ever since the discovery of human pluripotent stem cell technologies, cell replacement therapy has become a promising therapeutic strategy for these patients and may help restore visual function. Reproducibly generating enriched retinal cells including retinal progenitors and differentiated retinal neurons such as photoreceptors using human embryonic ...
[摘要] 视网膜变性导致光感受器丧失，最终导致视力损害，并给患者和社会带来沉重的负担。目前可用的治疗方案非常有限，主要是姑息治疗。自从人类多能干细胞技术的发现以来，细胞替代疗法已成为这些患者的有希望的治疗策略，并可能有助于恢复视觉功能。使用人类胚胎干（ES）细胞和诱导多能干（iPS）细胞在培养皿中重现性地产生包括视网膜祖细胞和分化的视网膜神经元（例如光感受器）的富集视网膜细胞是开发基于干细胞的治疗的重要的第一步。此外，这将为研究疾病机制提供可靠和充足的人类视网膜细胞供应。在这里，我们描述了一种小分子视网膜诱导协议，已被用于生成视网膜祖细胞和分化的视网膜神经元，包括来自几个人ES和iPS细胞系的光感受器。通过该方案产生的视网膜细胞可以在视网膜下移植后的几个月内存活并且功能性地整合到正常和患病的小鼠视网膜中。
【背景】世界各地的一些团体正在开发用于从人多能干细胞产生特定细胞类型的方法。这些细胞可能在再生医学的未来作为替代细胞的来源中发挥关键作用。这些新产生的人类细胞在开发更好和更准确的人类疾病模型中非常有用，然后可用于发现具有更好功效和安全性的新药。
我们的工作重点是影响全球数百万人的视网膜退行性疾病，如黄斑变性和视网膜色素变性。视网膜中光感受器的死亡通常与这些疾病相关，并导致严重损伤或全部视力丧失。没有有效的药物治疗可以治愈这些疾病。
...
|
|
|
| Isolation of Mouse Cardiac Neural Crest Cells and Their Differentiation into Smooth Muscle Cells
|
|
Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] Cardiac neural crest cells (CNCCs) originate at the dorsal edge of the neural tube between the otic pit and the caudal edge of the 3rd somite, and migrate into the pharyngeal arches and the heart. We have shown that fibronectin (Fn1) plays an important role in the development of the CNCC by regulating the differentiation of CNCCs into vascular smooth muscle cells around pharyngeal arch arteries (Wang and Astrof, 2016). This protocol describes the isolation of CNCCs from the neural tube and from the caudal pharyngeal arches, and the differentiation of neural crest-derived cells into ...
[摘要] 心脏神经嵴细胞（CNCC）起源于神经管的背部边缘，位于第3个体节的耳穴和尾缘之间，并迁移到咽弓和心脏。 我们已经表明，纤连蛋白（Fn1）通过调节CNCCs到咽弓动脉周围的血管平滑肌细胞的分化，在CNCC的发展中起重要作用（Wang and Astrof，2016）。 该方案描述了CNCC与神经管和尾尾弓的分离，以及神经嵴衍生细胞分化成平滑肌细胞。 该方案从（Newgreen和Murphy，2000; Pfaltzgraff等人，2012）改编。
【背景】以前发表的方案描述了从神经管分离神经嵴细胞。然而，在耳孔和第三体细胞之间的神经管区域中的神经嵴细胞包括有助于许多不同细胞类型的神经嵴细胞群体;例如，迷走神经嵴细胞也来自该区域。在该方案中，我们修改了用于分离心脏神经嵴细胞的常规方法。而不是使用神经管，我们在胚胎期（E）9.5（22-25个体节期）使用尾部咽部弓形区。这是在将心脏神经嵴细胞分化为血管平滑肌细胞之前。神经嵴培养物通常含有污染性间充质细胞，通常表达平滑肌基因。为了鉴定神经嵴衍生细胞，我们从以下交叉产生的胚胎中分离出神经嵴细胞：Fn1flox / flox; ROSAmTmG / mTmG雌性小鼠×Fn1 +/-;Tfap2αIRESCre/ ...
|
|
|
| Isolation and Culture of Human CD133+ Non-adherent Endothelial Forming Cells
|
|
Author:
Date:
2016-04-05
[Abstract] Circulating endothelial progenitor cells (EPCs) have been the focus of many clinical trials due to their roles in revascularisation following ischemic events such as acute myocardial infarction as well as their contribution to vascular repair during organ transplantation. Research on EPCs has been controversial due to the lack of distinct markers expressed at the cell surface and varying methods for isolation and culture have resulted in the identification of a multitude of cell types, with differing phenotype and function, all falling under the label of “EPCs”. The most widely documented ...
[摘要] 循环内皮祖细胞（EPCs）已经成为许多临床试验的焦点，因为它们在缺血事件例如急性心肌梗死后的血管再形成中的作用以及它们在器官移植期间对血管修复的贡献。由于缺乏在细胞表面表达的不同标记物，EPCs的研究已经引起争议，并且用于分离和培养的不同方法导致鉴定了具有不同表型和功能的多种细胞类型，所有这些都属于" EPCs"。分离用于细胞治疗的最广泛记载的EPCs本质上是粘附的，缺乏祖细胞标志物例如CD133，因此不太可能代表真正的循环EPC，所述细胞响应于血管损伤而动员。
我们最近发布了非粘附内皮形成细胞（naEFCs）群体的分离和广泛表征（Appleby等人，2012）（图1）。这些细胞与成熟内皮细胞标记（VEGFR2，CD144和CD31）一起表达祖细胞标记（CD133，CD34，CD117，CD90和CD38）。这些细胞还表达低水平的CD45，但不表达将其与"早期"EPC区分开的淋巴标志物（CD3，CD4，CD8）或骨髓标志物（CD11b和CD14），"晚期生长EPC"[最近称为内皮细胞集落形成细胞（ECFCs）]以及成熟内皮细胞（ECs）。图2A例示了naEFC的表面表达谱。功能研究证明这些naEFC（i）结合于玻璃体凝集素（图2A），（ii）显示乙酰化低密度脂蛋白摄取，（iii）增加血管细胞粘附分子（VCAM-1）响应于肿瘤坏死因子的表达和（iv）与成熟EC的共培养增加了在三维体外基质中的管，小管分支和环的数目。更重要的是，放置在体内的naEFC产生了包含由表达CD144的人EC内衬的脉管系统的新腔，并且有助于科学知识的各种进步（Appleby等人，2012; ...
|
|
|