| Measurement of Mesenchymal Stem Cells Attachment to Endothelial Cells
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Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] Mesenchymal stem cells (MSCs) have shown profound therapeutic potential in tissue repair and regeneration. However, recent studies indicate that MSCs are largely entrapped in lungs after intravenous delivery and die shortly. The underlying mechanisms have been poorly understood. We have provided evidence to show that excess expression and activation of integrins in culture-expanded MSCs is a critical cause of MSCs adhesion to endothelial cells of the lung microarteries resulting in the entrapment of the cells (Wang et al., 2015). Therefore, it may be meaningful to test the adhesive ...
[摘要] 间充质干细胞（MSCs）在组织修复和再生中显示出深远的治疗潜力。 然而，最近的研究表明，MSCs在静脉内递送后很大程度上被截留在肺中并且很快死亡。 基本的机制一直不甚了解。 我们提供的证据表明培养扩增的MSCs中整联蛋白的过量表达和活化是MSCs与肺微动脉的内皮细胞粘附的关键原因，导致细胞的包埋（Wang等人 >，2015）。 因此，在静脉给药之前测试MSC对体外内皮细胞的粘附能力以避免它们的肺血管阻塞可能是有意义的。 在这里，我们报告了一种简单的方法来衡量MSC与内皮细胞的附着。
【背景】间充质干细胞（MSCs）正在成为一种极具潜力的治疗药物，许多临床试验正在进行中（Salem和Thiemermann，2010）。由于MSC的方便性和安全性，静脉输注MSCs已成为近期临床试验中MSCs治疗的流行途径（Wu and Zhao，2012）。然而，越来越多的证据表明，MSCs在血管内注射后引起相当大的血管阻塞。在静脉内输注时，超过80％的MSC被包埋在肺中，并且在急性缺血性心脏或脑中仅检测到少于1％的MSC（Lee等人，2009; Toma等人，等人，2009年）。
最近的研究表明，MSCs在静脉内给药后大部分停留在前毛细血管微血管中，并且其中大部分在短期内局部缺血死亡（Toma等人，2009）。因此，血管内给药的MSC的安全性和有效性已成为人们日益关注的问题。尚未完全了解MSCs血管阻塞的机制。 ...
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| Secretion of Adipsin as an Assay to Measure Flux from the Endoplasmic Reticulum (ER)
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] In this protocol we describe a quantitative biochemical assay to assess the efficiency of endoplasmic reticulum (ER) to Golgi protein transport in adipocytes (Bruno et al., 2016). The assay takes advantage of the fact that adipocytes secrete various bioactive proteins, known as adipokines. As a measure of ER to Golgi flux we determine the rate of bulk secretion of the adipokine adipsin post washout of Brefeldin A (BFA) treatment using immunoblotting. Because BFA treatment results in an accumulation of adipsin in the ER, the exit of adipsin from the ER upon BFA washout is synchronized ...
[摘要] 在该方案中，我们描述了一种定量生化测定法来评估内质网（ER）对脂肪细胞中高尔基体蛋白质转运的效率（Bruno等，2016）。 该测定法利用脂肪细胞分泌各种生物活性蛋白质（称为脂肪因子）的事实。 作为对高尔基体通量的ER的测量，我们使用免疫印迹法确定了使用Brefeldin A（BFA）处理的脂肪因子adipsin后消失的体积分泌速率。 因为BFA治疗导致ER中Adipsin的积累，所以在BFA洗脱时，Adipsin从ER的出口在细胞和实验条件下同步。 因此，使用这种简单的测定法可以稳健地确定扰动，如敲低蛋白质，是否对高尔基蛋白转运的ER有影响。
【背景】新合成的蛋白质通过分泌途径从细胞分泌到细胞膜（PM）中。分泌路线包括从ER到高尔基体的运输，穿过高尔基体堆叠，以及从高尔基网络（TGN）到PM的运动。这些运输步骤中的每一个提供用于调节分泌物的节点。虽然大多数细胞能够分泌蛋白质，但某些特定的细胞类型是特异性蛋白质的专业秘密。脂肪细胞，例如，分泌激素，称为脂肪因子，影响各种器官的能量代谢。为了更好地了解脂肪因子分泌的分子基础，我们开发了一种测定方法，研究了从ER到脂肪细胞的高尔基体的脂肪因子，一种脂肪因子的转运。研究ER到高尔基体运输的传统和常用的方法是监测从ER融合到GFP（VSVG-GFP）的温度敏感性水泡性口炎病毒G蛋白ts045的出口（Presley等，1997）。使用adipsin分泌测定法研究脂肪细胞中的高铁运输的优点是监测来自ER的内源性蛋白质的通量，而不是异位表达的报道蛋白。 ...
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| Isolation and Culture of Human CD133+ Non-adherent Endothelial Forming Cells
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Author:
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2016-04-05
[Abstract] Circulating endothelial progenitor cells (EPCs) have been the focus of many clinical trials due to their roles in revascularisation following ischemic events such as acute myocardial infarction as well as their contribution to vascular repair during organ transplantation. Research on EPCs has been controversial due to the lack of distinct markers expressed at the cell surface and varying methods for isolation and culture have resulted in the identification of a multitude of cell types, with differing phenotype and function, all falling under the label of “EPCs”. The most widely documented ...
[摘要] 循环内皮祖细胞（EPCs）已经成为许多临床试验的焦点，因为它们在缺血事件例如急性心肌梗死后的血管再形成中的作用以及它们在器官移植期间对血管修复的贡献。由于缺乏在细胞表面表达的不同标记物，EPCs的研究已经引起争议，并且用于分离和培养的不同方法导致鉴定了具有不同表型和功能的多种细胞类型，所有这些都属于" EPCs"。分离用于细胞治疗的最广泛记载的EPCs本质上是粘附的，缺乏祖细胞标志物例如CD133，因此不太可能代表真正的循环EPC，所述细胞响应于血管损伤而动员。
我们最近发布了非粘附内皮形成细胞（naEFCs）群体的分离和广泛表征（Appleby等人，2012）（图1）。这些细胞与成熟内皮细胞标记（VEGFR2，CD144和CD31）一起表达祖细胞标记（CD133，CD34，CD117，CD90和CD38）。这些细胞还表达低水平的CD45，但不表达将其与"早期"EPC区分开的淋巴标志物（CD3，CD4，CD8）或骨髓标志物（CD11b和CD14），"晚期生长EPC"[最近称为内皮细胞集落形成细胞（ECFCs）]以及成熟内皮细胞（ECs）。图2A例示了naEFC的表面表达谱。功能研究证明这些naEFC（i）结合于玻璃体凝集素（图2A），（ii）显示乙酰化低密度脂蛋白摄取，（iii）增加血管细胞粘附分子（VCAM-1）响应于肿瘤坏死因子的表达和（iv）与成熟EC的共培养增加了在三维体外基质中的管，小管分支和环的数目。更重要的是，放置在体内的naEFC产生了包含由表达CD144的人EC内衬的脉管系统的新腔，并且有助于科学知识的各种进步（Appleby等人，2012; ...
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