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MOPS

MOPS

公司名称: Sigma-Aldrich
产品编号: M1254
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In vivo and in vitro 31P-NMR Study of the Phosphate Transport and Polyphosphate Metabolism in Hebeloma cylindrosporum in Response to Plant Roots Signals
Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract]  We used in vivo and in vitro phosphorus-31 nuclear magnetic resonance (31P-NMR) spectroscopy to follow the change in transport, compartmentation and metabolism of phosphate in the ectomycorrhizal fungus Hebeloma cylindrosporum in response to root signals originating from host (Pinus pinaster) or non-host (Zea mays) plants. A device was developed for the in vivo studies allowing the circulation of a continuously oxygenated mineral solution in an NMR tube containing the mycelia. The in vitro studies were performed on ... [摘要]  我们使用体内和体外磷-31核磁共振( 31 P-NMR)光谱来跟踪运输,分区和 外生菌根真菌 Hebeloma cylindrosporum 中的磷酸盐代谢响应来自宿主( Pinus pinaster )或非宿主( Zea mays )的根信号植物。 开发了一种用于体内研究的装置,其允许连续氧化的矿物质溶液在含有菌丝体的NMR管中循环。 在几个连续的处理步骤(在液氮中冷冻;用高氯酸压碎;消除高氯酸;冷冻干燥;在适当的液体培养基中溶解)后,对真菌材料进行体外研究。

【背景】 菌根真菌和植物之间的关联改善了宿主植物的P营养(Smith和Read,2008; Plassard和Dell,2010; Cairney,2011; Smith 等人,,2015)。这种积极效应主要归因于真菌菌丝对磷酸盐(Pi)的吸收,探测了在活跃吸收根周围的耗竭区以外的大量土壤(Smith和Read,2008; Cairney,2011; Smith et al。< em="">,2015)和真菌细胞分泌细胞外磷酸酶(Quiquampoix和Mousain,2005)。吸收的Pi部分地掺入磷酸化的代谢物,磷脂和核酸中,并且部分地浓缩成多磷酸盐(PolyP),其中它们构成液泡中的储存池(Ashford 等人,,1994)。该协议详述了一种装置,该装置允许通过 31 ...

Isolation of Nuclei in Tagged Cell Types (INTACT), RNA Extraction and Ribosomal RNA Degradation to Prepare Material for RNA-Seq
Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract]  Gene expression is dynamically regulated on many levels, including chromatin accessibility and transcription. In order to study these nuclear regulatory events, we describe our method to purify nuclei with Isolation of Nuclei in TAgged Cell Types (INTACT). As nuclear RNA is low in polyadenylated transcripts and conventional pulldown methods would not capture non-polyadenylated pre-mRNA, we also present our method to remove ribosomal RNA from the total nuclear RNA in preparation for nuclear RNA-Seq. [摘要]  基因表达在多个水平上动态调节,包括染色质可及性和转录。 为了研究这些核调节事件,我们描述了我们用净化细胞核(INTACT)纯化细胞核的方法。 由于核RNA在聚腺苷酸化转录物中低并且常规下拉方法不会捕获非聚腺苷酸化前mRNA,所以我们还提出了我们的方法以从核RNA总RNA中去除核糖体RNA以准备核RNA-Seq。

【背景】分离用于基因表达实验的特定细胞类型降低了噪音并提高了实验的精确度和发现的不同表达基因的数量。用于细胞类型特异性研究的各种方法被广泛使用,每种方法都有其优点和缺点(Bailey-Serres,2013年综述)。分离特定的调控区室,如细胞核(来自细胞器,核糖体,细胞质,等等)可以进一步精确解析调控基因表达的分子事件。在这里,我们描述了一种方法,可以从冷冻组织中分离特定细胞类型的细胞核,适用于研究核基因表达的实验(例如,核RNA的RNA-Seq,ATAC-Seq,ChIP -Seq,等。)。此外,我们描述了RNA的处理,导致材料适合作为RNA-Seq实验的输入。这里描述的方案与水稻根组织(日本野生稻栽培品种日本晴)(Reynoso等人,2018年)一起使用,但是它们基于以前开发的方案, (拟订和Henikoff,2010年和2011年)和番茄(罗恩等人,2014年)。

该协议的第一部分,INTACT方法(用于标记特定细胞类型的核的分离)允许体内亲和标记和随后从感兴趣的细胞类型中纯化细胞核。这是通过由包膜靶向结构域,GFP和生物素连接酶识别肽(BLRP)组成的三联核标签融合蛋白(NTF)的细胞类型特异性表达实现的。 ...

Plasma Membrane Preparation from Lilium davidii and Oryza sativa Mature and Germinated Pollen
Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract]  Pollen germination is an excellent process to study cell polarity establishment. During this process, the tip-growing pollen tube will start elongating. The plasma membrane as the selectively permeable barrier that separates the inner and outer cell environment plays crucial roles in this process. This protocol described an efficient aqueous polymer two-phase system followed by alkaline solution washing to prepare Lilium davidii or Oryza sativa plasma membrane with high purity. [摘要]  花粉萌发是研究细胞极性的一个很好的过程。在此过程中,尖端生长的花粉管将开始延长。作为分离内外细胞环境的选择性渗透屏障的质膜在该过程中起关键作用。该方案描述了一种有效的含水聚合物两相体系,接着进行碱性溶液洗涤以制备高纯度的百合百合或水稻质膜。

背景 花粉质膜包含对花粉管生长和受精至关重要的各种蛋白质,例如受体样激酶(Wang等人,2016)和离子通道(Hamilton等人, em>,2015)。分离纯质膜(PM)是综合PM蛋白质组分析的前提。 PM制备主要有四种方法:差速离心,密度梯度离心,制备型自由流动电泳和含水聚合物两相体系。通常,差速离心通常与密度梯度离心合并,以根据其大小,形状和密度分离亚细胞组分。这种技术是快速的,但是由于细胞器密度的重叠,所得的PM产率和纯度都很低(Schindler和Nothwang,2006)。自由流动电泳和水性聚合物两相系统根据其表面性质分离膜囊泡。这两种方法可以富集PM足够纯化蛋白质组学分析(Alexandersson等人,2007)。然而,用于自由流动电泳的仪器操作复杂(Sandelius等人,1986)。相比之下,通过离心可以容易且快速地进行含水聚合物两相体系,使得该方法对PM制备更方便。 ...

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