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Date:
2016-04-05
[Abstract] This effective, robust protocol generates glass coverslips coated with biotin-functionalized polyethylene glycol (PEG), making the glass surface resistant to non-specific absorption of biomolecules, and permitting immobilization of biomolecules for subsequent single-molecule tracking of biochemical reactions. The protocol can be completed in one day, and the coverslips can be stored for at least 1 month. We have confirmed that the PEG surfaces prepared according to the protocol are resistant to non-specific adsorption by a wide range of biomolecules (bacterial, mitochondrial, and human ...
[摘要] 这种有效的，稳健的方案产生涂覆有生物素官能化聚乙二醇（PEG）的玻璃盖玻片，使得玻璃表面对生物分子的非特异性吸收具有抗性，并允许固定生物分子以用于随后的单分子跟踪生化反应。 协议可以在一天内完成，盖玻片可以存储至少1个月。 我们已经证实，根据方案制备的PEG表面可以通过广泛的生物分子（细菌，线粒体和人转录因子，DNA和RNA）和生物缓冲液的非特异性吸附抗性。
【背景】研究生物分子动力学的单分子成像方法通过允许实时跟踪多步反应而不需要同步试剂来补充传统的“大量”生物化学方法（Weiss，1999）。在大多数单分子成像方法中，首先用单个荧光团标记感兴趣的生物分子，然后将标记的生物分子固定在光学透明的表面（通常为玻璃或二氧化硅）上，并且被检测为衍射受限图像（“斑点”）使用配有高灵敏度相机的光学显微镜（Selvin和Ha，2008）。表面固定有两个目的。首先，它允许在超过几百毫秒的时间尺度上跟踪分子态（否则，生物分子将扩散到焦平面外）。第二，表面允许在全内反射几何中激发荧光（Axelrod，1981），其显着地增加了与表面接近（<100nm）位置的分子的检测的信噪比（selvin和哈，2008）。尽管有这些明显的优势，表面也是单分子分析中最常见的人为因素（visnapuu et=""> ...
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