| Cloud-point PEG Glass Surfaces for Imaging of Immobilized Single Molecules by Total-internal-reflection Microscopy
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Author:
Date:
2016-04-05
[Abstract] This effective, robust protocol generates glass coverslips coated with biotin-functionalized polyethylene glycol (PEG), making the glass surface resistant to non-specific absorption of biomolecules, and permitting immobilization of biomolecules for subsequent single-molecule tracking of biochemical reactions. The protocol can be completed in one day, and the coverslips can be stored for at least 1 month. We have confirmed that the PEG surfaces prepared according to the protocol are resistant to non-specific adsorption by a wide range of biomolecules (bacterial, mitochondrial, and human ...
[摘要] 这种有效的，稳健的方案产生涂覆有生物素官能化聚乙二醇（PEG）的玻璃盖玻片，使得玻璃表面对生物分子的非特异性吸收具有抗性，并允许固定生物分子以用于随后的单分子跟踪生化反应。 协议可以在一天内完成，盖玻片可以存储至少1个月。 我们已经证实，根据方案制备的PEG表面可以通过广泛的生物分子（细菌，线粒体和人转录因子，DNA和RNA）和生物缓冲液的非特异性吸附抗性。
【背景】研究生物分子动力学的单分子成像方法通过允许实时跟踪多步反应而不需要同步试剂来补充传统的“大量”生物化学方法（Weiss，1999）。在大多数单分子成像方法中，首先用单个荧光团标记感兴趣的生物分子，然后将标记的生物分子固定在光学透明的表面（通常为玻璃或二氧化硅）上，并且被检测为衍射受限图像（“斑点”）使用配有高灵敏度相机的光学显微镜（Selvin和Ha，2008）。表面固定有两个目的。首先，它允许在超过几百毫秒的时间尺度上跟踪分子态（否则，生物分子将扩散到焦平面外）。第二，表面允许在全内反射几何中激发荧光（Axelrod，1981），其显着地增加了与表面接近（<100nm）位置的分子的检测的信噪比（selvin和哈，2008）。尽管有这些明显的优势，表面也是单分子分析中最常见的人为因素（visnapuu et=""> ...
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| Carotenoid Extraction and Quantification from Capsicum annuum
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Author:
Date:
2014-10-05
[Abstract] Carotenoids are ubiquitous pigments that play key roles in photosynthesis and also accumulate to high levels in fruit and flowers. Specific carotenoids play essential roles in human health as these compounds are precursors for Vitamin A; other specific carotenoids are important sources of macular pigments and all carotenoids are important anti-oxidants. Accurate determination of the composition and concentration of this complex set of natural products is therefore important in many different scientific areas. One of the richest sources of these compounds is the fruit of Capsicum; ...
[摘要] 类胡萝卜素是在光合作用中起关键作用的普遍存在的颜料，并且在果实和花中积累到高水平。 特定类胡萝卜素在人类健康中起着重要作用，因为这些化合物是维生素A的前体; 其他特定类胡萝卜素是黄斑色素的重要来源，并且所有类胡萝卜素是重要的抗氧化剂。 因此，在许多不同的科学领域中，精确测定天然产物的复杂集合的组成和浓度是重要的。 这些化合物最丰富的来源之一是辣椒的果实。 这些红色，黄色和橙色果实积累多个胡萝卜素和叶黄素。 本报告描述了特定胡萝卜素和叶黄素的提取和定量的详细方法。
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| Fluorescent Dye Based Measurement of Vacuolar pH and K+
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Author:
Date:
2013-07-05
[Abstract] Availability of ion specific fluorescent dyes has enabled the possibility to perform in vivo ion specific measurements using live cell imaging in many cellular compartments (Krebs et al., 2010; Bassil et al., 2011; Halperin and Lynch, 2003; Swanson et al., 2011; O'Connor and Silver, 2007). The importance of ion and pH homeostasis of intracellular compartments, including the vacuole, to cell growth is critical and well established (Krebs et al., 2010; Bassil et al., 2011).
* Dedicated to Stephen Halperin who tragically and unexpectedly ...
[摘要] 离子特异性荧光染料的可用性使得能够在许多细胞区室中使用活细胞成像在体内进行离子特异性测量（Krebs等人，2010; Bassil 2011; Halperin和Lynch，2003; Swanson等人，2011; O'Connor和Silver，2007）。 细胞内区室（包括液泡）的离子和pH稳态对细胞生长的重要性是关键的并且得到充分确立（Krebs等人，2010; Bassil等人， 2011）。
*致力于史蒂芬·哈尔佩林，他悲惨地意外地去世了。
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