| Generation of Caenorhabditis elegans Transgenic Animals by DNA Microinjection
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Author:
Date:
2017-10-05
[Abstract] Microinjection is the most frequently used tool for genetic transformation of the nematode Caenorhabditis elegans, facilitating the transgenic expression of genes, genome editing by the clustered regularly interspersed short palindromic repeats (CRISPR)-Cas9 system, or transcription of dsRNA for RNA intereference (RNAi). Exogenous DNA is delivered into the developing oocytes in the germline of adult hermaphrodites, which then generate transgenic animals among their offspring. In this protocol, we describe the microinjection procedure and the subsequent selection of transgenic progeny.
[摘要] 显微注射是线虫秀丽隐杆线虫遗传转化中最常用的工具，促进基因的转基因表达，通过聚集的定期散布的短回文重复序列（CRISPR）-Cas9系统的基因组编辑或转录 dsRNA用于RNA干扰（RNAi）。 外源DNA被递送到成年雌雄同株的种系中的发育中的卵母细胞中，然后在它们的后代中产生转基因动物。 在该方案中，我们描述了显微注射程序和随后的转基因后代选择。
【背景】在C.通过显微注射的DNA转化通常用于产生过表达或异位表达可以与标签（例如，绿色荧光蛋白[GFP]）融合的基因的转基因动物，允许突变体的表型拯救和/或蛋白质的定位和功能的分析（Carter等人，1990; Chalfie等人，1994; Mello和Fire，1995）。聚集的定期散布的短回文重复（CRISPR）-Cas9系统的出现需要显微注射以通过引入点突变或插入/缺失突变来实现高度特异性的基因组编辑（概述于Dickinson和Goldstein，2016）。此外，该技术被应用于dsRNA的可诱导和/或组织特异性转录以便于遗传性RNA干扰（RNAi）（Tavernarakis等人，2000） ...
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| Primary Neuron-glia Culture from Rat Cortex as a Model to Study Neuroinflammation in CNS Injuries or Diseases
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Author:
Date:
2016-04-20
[Abstract] Primary neuron-glia cultures are commonly used in vitro model for neurobiological studies. Here, we provide a protocol for the isolation and culture of neuron-glial cells from cortical tissues of 1-day-old neonatal Sprague-Dawley pups. The procedure makes available an easier way to obtain the neuron and glia. In this culture system, neuron-glia cultures consisted of approximately 37% neurons, 51% astrocytes, 7% microglia, and a small percentage (<5%) of other cells after fourteen days in vitro. Primary neuron-glia cultures is a simplified in vitro model for ...
[摘要] 原代神经元 - 神经胶质培养物通常用于神经生物学研究的体外模型。在这里，我们提供的隔离和培养的神经元胶质细胞从1日龄新生儿Sprague-Dawley幼崽的皮质组织的协议。该程序提供了一种更容易的方式来获得神经元和神经胶质。在该培养系统中，神经元 - 神经胶质培养物在体外14天后由约37％神经元，51％星形胶质细胞，7％小胶质细胞和小百分比（<5％）的其他细胞组成。原代神经元胶质细胞培养物是用于研究的简化的体外模型，其关注于神经元和神经胶质细胞之间的相互作用。活化的胶质细胞，主要是星形胶质细胞和小神经胶质细胞，是中枢神经系统（cns）或慢性神经疾病的急性损伤的组织病理学标志（hirsch和hunot，2009; lee等人，2009; minghetti， 2005）。由活化神经胶质释放的炎性介质（例如一氧化氮，活性氧，促炎细胞因子和趋化因子）可直接或间接引起神经元损伤或神经变性。神经炎症是导致神经变性的各种神经疾病的常见机制。神经胶质细胞培养的优点是：（1）培养的细胞可以在体内绕过复杂的生理相互作用（例如白细胞浸润，血脑屏障，反射或其他系统调节）以允许直接观察（缺氧，缺血，创伤，感染，神经毒素，慢性应激或疾病）引起的神经炎症; （2）与主要源自肿瘤细胞的细胞系不同，原代培养的神经元 - 神经胶质系统更接近于体内细胞群体比率，并且可以模拟原位微环境;和（3）可以从各种脑区域（例如皮质，海马，中脑等）制备培养物，并且允许有机会检查对神经变性的易感性的区域差异随后由各种cns损伤引起的神经炎症（kim等人，2000）。以下方案是原代大鼠皮质神经元 - 神经胶质培养物制备的实例（huang等人，2015; huang等人，2014; huang等人。，2012; huang ，，2009）。
lee等人，2009;="" minghetti，="" 2005）。由活化神经胶质释放的炎性介质（例如一氧化氮，活性氧，促炎细胞因子和趋化因子）可直接或间接引起神经元损伤或神经变性。神经炎症是导致神经变性的各种神经疾病的常见机制。神经胶质细胞培养的优点是：（1）培养的细胞可以在体内绕过复杂的生理相互作用（例如白细胞浸润，血脑屏障，反射或其他系统调节）以允许直接观察（缺氧，缺血，创伤，感染，神经毒素，慢性应激或疾病）引起的神经炎症;="" （2）与主要源自肿瘤细胞的细胞系不同，原代培养的神经元="" -="" 神经胶质系统更接近于体内细胞群体比率，并且可以模拟原位微环境;和（3）可以从各种脑区域（例如皮质，海马，中脑等）制备培养物，并且允许有机会检查对神经变性的易感性的区域差异随后由各种cns损伤引起的神经炎症（kim等人，2000）。以下方案是原代大鼠皮质神经元="" -="" 神经胶质培养物制备的实例（huang等人，2015;="" huang等人，2014;="" huang等人。，2012;="" huang="" ，，2009）。=""> ...
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