| Efficient Transient Gene Knock-down in Tobacco Plants Using Carbon Nanocarriers
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] Gene knock-down in plants is a useful approach to study genotype-phenotype relationships, render disease resistance to crops, and enable efficient biosynthesis of molecules in plants. Small interfering RNA (siRNA)-mediated gene silencing is one of the most common ways to achieve gene knock-down in plants. Traditionally, siRNA is delivered into intact plant cells by coding the siRNA sequences into DNA vectors, which are then delivered through viral and/or bacterial methods. In this protocol, we provide an alternative direct delivery method of siRNA molecules into intact plant cells for ...
[摘要] [摘要]植物基因敲低是研究基因型与表型关系，提高作物对病害的抵抗力以及实现植物分子高效生物合成的有用方法。小干扰RNA（siRNA）介导的基因沉默是在植物中实现基因敲低的最常见方法之一。传统上，通过将siRNA序列编码到DNA载体中，将siRNA传递到完整的植物细胞中，然后通过病毒和/或细菌方法传递。在这个协议中，我们提供的siRNA分子的替代直接递送方法为完整的植物细胞的高效瞬时根Ë击倒在模型的烟草植物，烟草本塞姆氏烟草，叶子。我们的方法使用一维碳基纳米材料，单壁碳纳米管（SWNTs）来传递siRNA，而不依赖于病毒/细菌的传递。我们方法的独特优势在于：i ）不需要对siRNA序列进行DNA编码； ii）与非生物方法相比，这种非生物方法可在更广泛的植物物种中起作用，并且iii）使用非生物递送时，调节并发症更少方法，其中基因沉默是瞬时的，而无需对植物基因组进行永久性修饰。
图形摘要：
图形抽象标题
[背景技术[ 0002 ]在1990年代初，植物研究人员研究矮牵牛花的着色发现了通过RNA干扰（RNAi）引起的基因沉默（Van der ...
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| Genomic Edition of Ashbya gossypii Using One-vector CRISPR/Cas9
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Author:
Date:
2020-06-20
[Abstract] The CRISPR/Cas9 system is a novel genetic tool which allows the precise manipulation of virtually any genomic sequence. In this protocol, we use a specific CRISPR/Cas9 system for the manipulation of Ashbya gossypii. The filamentous fungus A. gossypii is currently used for the industrial production of riboflavin (vitamina B2). In addition, A. gossypii produces other high-value compounds such as folic acid, nucleosides and biolipids. A large molecular toolbox is available for the genomic manipulation of this fungus including gene targeting methods, rapid assembly of ...
[摘要] [摘要] CRISPR/Cas9系统是一种新的基因工具，可以精确地操作几乎所有的基因组序列。在这个协议中，我们使用一个特定的CRISPR/Cas9系统来操纵棉蚜。丝状真菌A.gossypii目前用于核黄素（vitamina B2）的工业生产。此外，棉蚜还产生其他高价值化合物，如叶酸、核苷和生物脂类。一个大型的分子工具箱可用于该真菌的基因组操作，包括基因靶向方法、异源表达模块的快速组装，以及最近一个适用于棉铃虫的单载体CRISPR/Cas9编辑系统，该系统允许实施无标记工程策略。CRISPR/Cas9系统包括RNA引导的DNA内切酶（Cas9）和与基因组靶区互补的引导RNA（gRNA）。Cas9核酸酶需要5′-NGG-3′三核苷酸，称为原间隔基序（PAM），在基因组靶区产生一个双链断裂（DSB），该断裂可以通过同源重组（HR）由合成的致突变供体DNA（dDNA）修复，从而引入一个特定的设计突变。适用于棉铃虫的CRISPR/Cas9系统极大地促进了这种工业真菌的基因组编辑。
[背景] ...
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| Laser Scanning Confocal Microcopy for Arabidopsis Epidermal, Mesophyll, and Vascular Parenchyma Cells
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Author:
Date:
2017-03-05
[Abstract] Investigation of protein targeting to plastids in plants by confocal laser scanning microscopy (CLSM) can be complicated by numerous sources of artifact, ranging from misinterpretations from in vivo protein over-expression, false fluorescence in cells under stress, and organellar mis-identification. Our studies have focused on the plant-specific gene MSH1, which encodes a dual targeting protein that is regulated in its expression and resides within the nucleoid of a specialized plastid type (Virdi et al., 2016). Therefore, our methods have been optimized to study ...
[摘要] 通过共焦激光扫描显微镜（CLSM）对植物中质体进行蛋白质靶向的研究可能由于许多来源的伪像而复杂化，其范围从体内蛋白质过度表达的误解，应激细胞中的假荧光，和细胞器错误识别。我们的研究集中在植物特异性基因MSH1上，其编码双重靶向蛋白，其在其表达中被调节并且位于特定质体类型的核内（Virdi等人，2016）。因此，我们的方法已被优化，以研究蛋白质双重靶向线粒体和质体，蛋白质表达的空间和时间调节和亚细胞定位，产生其他人可能对这些研究有用的方案和一组实验标准。
背景 植物中的蛋白质靶向行为受氨基末端前序列以及可影响亚组织定位行为的内部序列特征的影响（Baginsky和Gruissem，2004）。结合启动子驱动的表达空间和时间调节，蛋白质的活性可以通过时间和位置而非常精确和专一。在MSH1的情况下，这种核编码的植物特异性蛋白质是双重靶向线粒体和质体（Xu et al。，2011）。启动子特征将其表达指导到生殖，表皮和血管薄壁细胞（Virdi等人，2016）。内部蛋白质特征将其定位于线粒体和质体核，以及质体类囊体膜。使用这里描述的方法，通过激光扫描共聚焦显微镜大大促进了这些不寻常的蛋白质特征的发现。使用更传统的细分器分割方法，大部分细节将被忽略。
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