| Quantifying Podocytes and Parietal Epithelial Cells in Human Urine Using Liquid-based Cytology and WT1 Immunoenzyme Staining
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Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] In glomerular disease, podocytes and parietal epithelial cells (PECs) are shed in the urine. Therefore, urinary podocytes and PECs are noninvasive biomarkers of glomerular disease. The purpose of this protocol is to employ immunocytochemistry to detect podocytes and PECs, using the WT1 antibody on liquid-based cytology slides.
[摘要] 在肾小球疾病中，足细胞和顶壁上皮细胞（PEC）在尿中脱落。 因此，尿足细胞和PECs是肾小球疾病的非侵入性生物标志物。 该协议的目的是使用免疫细胞化学来检测足细胞和PEC，在液基细胞学载玻片上使用WT1抗体。
【背景】足细胞排列在肾小球毛细血管的外部，因此面对鲍曼氏囊和初级尿。在肾小球损伤中，足细胞可能从肾小球基底膜脱落。足细胞的脱落及其在尿液中的脱落与肾小球疾病和月牙形成的进展有关。顶壁上皮细胞（PECs）覆盖鲍曼囊的内部。与足细胞类似，已经报道了在活动性肾小球疾病期间PEC对WT1呈阳性，增殖并在尿中脱落（Zhang等人，2012; Fujita等人 >，2017）。
先前的研究已经显示了尿足细胞和PECs的数量与各种类型的肾小球疾病之间的关系（Hara等人，1998; Nakamura等人，2000; Achenbach ，2008）。上述引用的研究使用常规方法（直接涂片和细胞离心涂片）来制备尿样。然而，这些常规方法具有常见问题，包括风干效应和在细胞离心和固定过程期间显着细胞损失的可能性。另外，传统方法的标准化和定量评估是困难的。虽然以前大多数研究使用免疫荧光染色与podocalyxin抗体，但由于特异性抗原和荧光显微镜的要求，这种方法在中小医院很难实现。
有用的尿生物标志物检测应该容易实施，并且对标准化样品制备和免疫细胞化学的要求最低。因此，我们设计了一种通过结合液基细胞学，WT1抗体和免疫酶染色来检测足细胞和PEC的方法。由于其更好的细胞保存和更高的细胞回收率，SurePath ...
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| Determination of Local pH Differences within Living Salmonella Cells by High-resolution pH Imaging Based on pH-sensitive GFP Derivative, pHluorin(M153R)
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] The bacterial flagellar type III protein export apparatus is composed of a transmembrane export gate complex and a cytoplasmic ATPase complex. The export apparatus requires ATP hydrolysis and the proton motive force across the cytoplasmic membrane to unfold and transport flagellar component proteins for the construction of the bacterial flagellum (Minamino, 2014). The export apparatus is a proton/protein antiporter that couples the proton flow with protein transport through the gate complex (Minamino et al., 2011). A transmembrane export gate protein, FlhA, acts as an energy ...
[摘要] 细菌鞭毛III型蛋白质输出装置由跨膜出口门复合物和胞质ATP酶复合物组成。出口设备需要ATP水解和跨细胞质膜的质子动力来展开和转运鞭毛成分蛋白以构建细菌鞭毛（Minamino，2014）。出口设备是质子/蛋白质反向转运体，其将质子流与通过门络合物的蛋白质转运相结合（Minamino等，2011）。跨膜输出门蛋白FlhA与胞质ATP酶复合物一起作为能量转导（Minamino等，2016）。为了直接测量通过与鞭毛蛋白输出相结合的FlhA通道的质子流，我们开发了具有高空间和pH分辨率的体内pH成像系统（Morimoto等，2016）。在这里，我们描述了我们如何测量生活沙门氏菌细胞出口设备附近的局部pH（Morimoto et al。，2016）。我们的方法可以应用于广泛的活细胞。由于局部pH值是监测活细胞活性的最重要参数之一，因此我们的方案将广泛应用于生命科学的各个领域。
【背景】已经检测到跨膜质子通道复合物的质子通道活性是细菌细胞的细胞质pH降低（Morimoto等，2010; Che等，2014; Furukawa等，2017）。然而，为了详细测量活细胞中膜复合物的质子通道活性，需要精确测量局部细胞质pH。绿色荧光蛋白（GFP）的衍生物，pHluorin，激发波长为410和470 nm，发射于508 nm是测量活细胞胞质pH值的有用探针（Miesenböcket ...
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| Bacterial Intracellular Sodium Ion Measurement using CoroNa Green
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] The bacterial flagellar type III export apparatus consists of a cytoplasmic ATPase complex and a transmembrane export gate complex, which are powered by ATP and proton motive force (PMF) across the cytoplasmic membrane, respectively, and transports flagellar component proteins from the cytoplasm to the distal end of the growing flagellar structure where their assembly occurs (Minamino, 2014). The export gate complex can utilize sodium motive force in addition to PMF when the cytoplasmic ATPase complex does not work properly. A transmembrane export gate protein FlhA acts as a dual ion channel ...
[摘要] 细菌鞭毛III型出口设备由细胞质ATP酶复合物和跨膜出口门复合物组成，分别由ATP和质子动力（PMF）驱动跨越细胞质膜，并将鞭毛成分蛋白从细胞质转运到远端结束它们的组装发生的鞭毛结构（Minamino，2014）。当细胞质ATPase复合物不能正常工作时，出口门复合物可以利用除PMF之外的钠动力。跨膜出口门蛋白FlhA充当双离子通道，以进行H + 和Na + （Minamino等人，2016）。在这里，我们描述如何使用钠敏感荧光染料CoroNa Green（Minamino等人）测量活细胞大肠杆菌细胞中的细胞内Na+浓度，。，2016）。通过荧光显微镜检测CoroNa Green的荧光强度，可以定量测定细胞内Na +的浓度。
背景 通过荧光成像技术测量细胞内Na +浓度能够在单细胞水平上更精确和定量地进行，因为每个细胞的背景噪声可以通过图像分析程序去除。 Lo <等等。已经建立了用于测量活体中的细胞质Na +浓度的方案。使用钠敏感荧光染料钠绿，并显示细胞质Na +浓度维持在10mM左右。大肠杆菌在0至100mM的外部Na +浓度范围的宽范围内（Lo et al。，2006）。因为CoroNa ...
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