| HIV-CRISPR: A CRISPR/Cas9 Screening Method to Identify Genes Affecting HIV Replication
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Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract] Screening with CRISPR/Cas9 technology has already led to significant discoveries in the fields of cancer biology, cell biology and virology. Because of the relatively low false discovery rates and the ability to perform high-throughput, pooled approaches, it has rapidly become the assay of choice for screening studies, including whole-genome screens. Here, we describe a CRISPR screening protocol that allows for efficient screening of the entire life cycle of HIV-1 through packaging of the HIV-CRISPR lentiviral genomes by infecting HIV-1 virus in trans.
[摘要] [摘要 ] CRISPR / Cas9技术的筛选已经在癌症生物学，细胞生物学和病毒学领域引起了重大发现。由于相对较低的错误发现率和执行高通量，合并方法的能力，它发展迅速。成为筛选研究（包括全基因组筛选）的首选检测方法。在此，我们描述了一种CRISPR筛选方案，该方案可通过感染HIV-CRISPR慢病毒基因组来包装，从而有效筛选HIV-1的整个生命周期。病毒1 在 跨。
[背景] 遗传筛选是鉴定影响包括人类免疫缺陷病毒（HIV）在内的病毒复制的新基因的有力工具。鉴定对HIV感染重要的宿主基因有助于增强对HIV复制，进化，传播和发病机制的认识，这是关键利益所在。特别是在过去十年中，通常是干扰素（IFN）刺激基因（ISG）的HIV限制因子的发现已成为逆转录病毒学领域的关键发展。限制因子已集中在过度表达筛选上，以鉴定作用广泛的抗病毒ISG （Schoggins 等，2011）或专门针对HIV的因子（Kane 等，2016）。通过转染对HIV限制因子进行了全基因组筛选siRNA的池池在靶细胞（刘等人，2011年）。然而，这些方法缺乏稳健性，Versa的钛Lity，和高通量方面 因此，我们使用CRISPR / Cas9技术开发了一种创新的ap 方法，并依靠HIV交叉包装通过CRISPR / Cas9文库转导的细胞中表达的慢病毒基因组的能力（OhAinle ...
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| Reporter Assay for Semen-mediated Enhancement of HIV-1 Infection
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Author:
Date:
2016-07-20
[Abstract] Semen contains amyloid fibrils that enhance HIV-1 infection (Münch et al., 2007; Kim et al., 2010; Roan et al., 2011; Arnold et al., 2012; Usmani et al., 2014; Roan et al., 2014). Positively charged semen amyloids capture negatively charged viral particles and increase their attachment rates to the cell surface resulting in enhanced fusion and infection (Roan et al., 2009). Since semen is highly cytotoxic, we developed an assay that allows quantification of the infection enhancing activity of semen while minimizing its cell ...
[摘要] 精液含有增强HIV-1感染的淀粉样蛋白原纤维（Münch等，2007; Kim等，2010; Roan等，2011; Arnold等，2012; Usmani等，2014; Roan et al。 ，2014）。 带正电的精液淀粉样蛋白捕获带负电的病毒颗粒并增加其对细胞表面的附着率，导致增强的融合和感染（Roan等人，2009）。 由于精液具有高度的细胞毒性，我们开发了一种能够定量精液感染增强活性同时最大限度降低其细胞损伤活性的测定方法。 在这里，我们描述允许使用报道细胞系（TZM-bl细胞）或外周血单核细胞（PBMC）定量精液的感染性增强活性的两种方案。
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