| Sleeping Beauty Transposon-based System for Rapid Generation of HBV-replicating Stable Cell Lines
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] The stable HBV-transfected cell lines, which based on stable integration of replication-competent HBV genome into hepatic cells, are widely used in basic research and antiviral drug evaluation against HBV. However, previous reported strategies to generate HBV-replicating cell lines, which primarily rely on random integration of exogenous DNA by plasmid transfection, are inefficient and time-consuming. We newly developed an all-in-one Sleeping Beauty transposon system (denoted pTSMP-HBV vector) for robust generation of stable HBV-replicating cell lines of different genotype. The pTSMP-HBV ...
[摘要] 稳定的HBV转染细胞系基于将复制能力的HBV基因组稳定整合到肝细胞中，广泛用于基础研究和针对HBV的抗病毒药物评估。然而，先前报道的产生HBV复制细胞系的策略（其主要依赖于通过质粒转染的外源DNA的随机整合）是低效且耗时的。我们新开发了一体化睡眠美容转座子系统（表示为pTSMP-HBV载体），用于稳定产生不同基因型的稳定HBV复制细胞系。 pTSMP-HBV载体含有HBV1.3拷贝基因组和双重选择标记（mCherry和嘌呤霉素抗性基因），允许通过红色荧光激活细胞分选和嘌呤霉素抗生素选择快速富集稳定转染的细胞。在该方案中，我们描述了构建HBV复制稳定细胞和系统评估这些细胞的HBV复制和病毒蛋白表达谱的详细程序。
【背景】慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染目前是一个主要的公共卫生负担，影响全球超过2.4亿人（Witt-Kehati et al。，2016）。慢性HBV患者患慢性活动性肝炎，肝硬化或原发性肝细胞癌（HCC）的风险升高（Schweitzer et al。，2015）。目前用干扰素-α或核苷类似物治疗并不能根除病毒，它们对清除乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的作用有限（Lucifora和Protzer，2016; Soriano et al。，2017） 。因此，迫切需要开发新的抗病毒抑制剂（Nassal，2015）。
用于评估新药抗HBV活性的细胞培养模型是新药开发的重要工具。稳定的HBV复制细胞系，携带复制能力的HBV基因组稳定整合到人肝癌细胞系（Huh7和/或HepG2）的基因组中，被广泛用于评估抗病毒药物的作用（Witt-Kehati ...
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| Reporter Assay for Semen-mediated Enhancement of HIV-1 Infection
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Author:
Date:
2016-07-20
[Abstract] Semen contains amyloid fibrils that enhance HIV-1 infection (Münch et al., 2007; Kim et al., 2010; Roan et al., 2011; Arnold et al., 2012; Usmani et al., 2014; Roan et al., 2014). Positively charged semen amyloids capture negatively charged viral particles and increase their attachment rates to the cell surface resulting in enhanced fusion and infection (Roan et al., 2009). Since semen is highly cytotoxic, we developed an assay that allows quantification of the infection enhancing activity of semen while minimizing its cell ...
[摘要] 精液含有增强HIV-1感染的淀粉样蛋白原纤维（Münch等，2007; Kim等，2010; Roan等，2011; Arnold等，2012; Usmani等，2014; Roan et al。 ，2014）。 带正电的精液淀粉样蛋白捕获带负电的病毒颗粒并增加其对细胞表面的附着率，导致增强的融合和感染（Roan等人，2009）。 由于精液具有高度的细胞毒性，我们开发了一种能够定量精液感染增强活性同时最大限度降低其细胞损伤活性的测定方法。 在这里，我们描述允许使用报道细胞系（TZM-bl细胞）或外周血单核细胞（PBMC）定量精液的感染性增强活性的两种方案。
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