| A Live-imaging, Heat Shock-inducible System to Measure Aux/IAA Degradation Rates in Planta
|
|
Author:
Date:
2016-08-05
[Abstract] An emerging theme in biology is the importance of cellular signaling dynamics. In addition to monitoring changes in absolute abundance of signaling molecules, many signal transduction pathways are sensitive to changes in temporal properties of signaling components (Purvis and Lahav, 2013). The phytohormone auxin regulates myriad processes in plant development. Many of these require the nuclear auxin signaling pathway, in which degradation of the Aux/IAA repressor proteins allows for transcription of auxin-responsive genes (Korasick et al., 2015). Using a heterologous yeast system, we ...
[摘要] 生物学中一个新兴的主题是细胞信号传导动力学的重要性。除了监测信号分子的绝对丰度的变化，许多信号转导途径对信号传导组分的时间性质的变化敏感（Purvis和Lahav，2013）。植物激素生长素调节植物发育中的无数过程。这些中的许多需要核生长素信号通路，其中Aux/IAA阻抑蛋白的降解允许生长素应答基因的转录（Korasick等人，2015）。使用异源酵母系统，我们发现当与F-box蛋白分离共表达时，Aux/IAAs表现出一系列生长素诱导的降解速率（Havens等人，2012）。随后的连接信号动力学与植物生长和发育的研究证实Aux/IAAs在植物中显示相似的差异（Guseman等人，2015; Moss等人，2015）。在这里，我们详细描述热休克诱导荧光降解系统捕获Aux/IAA实时在活植物根中的降解的使用。通过采用这种方法，我们能够获得高的Aux/IAA表达，并避免抑制周转，反馈和沉默的长期影响。降解取决于Aux/IAA降解的存在，并且对外源生长素的反应速率增加。
|
|
|
| Expression, Purification and Crystallization of the Herpesvirus Nuclear Egress Complex (NEC)
|
|
Author:
Date:
2016-07-20
[Abstract] The protocol describes the production and crystallization of the soluble form of the nuclear egress complex (NEC) from Herpes simplex virus 1 and Pseudorabies virus. The NEC is a heterodimer that consists of conserved proteins UL31 and UL34. NEC oligomerization deforms the inner nuclear membrane around the capsid in infected cells, thereby mediating capsid budding into the perinuclear space during nuclear egress. We have successfully developed a protocol for large-scale preparation of highly pure NEC from two different viruses in a prokaryotic expression system, which enabled us to ...
[摘要] 该协议描述了来自单纯疱疹病毒1和伪狂犬病病毒的核出口复合物（NEC）的可溶形式的产生和结晶。 NEC是由保守蛋白UL31和UL34组成的异源二聚体。 NEC低聚使受感染细胞中的衣壳周围的内核膜变形，从而在核出口期间介导衣壳发芽进入核周空间。 我们已经成功地开发了一个协议，从大规模制备高纯度NEC从两种不同的病毒在原核表达系统，这使我们能够结晶这些病毒蛋白复合物和确定其结构。 该程序可适于纯化和结晶其它可溶性蛋白质复合物。
|
|
|