| A Streamlined Method for the Preparation of Growth Factor-enriched Thermosensitive Hydrogels from Soft Tissue
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Author:
Date:
2017-02-05
[Abstract] Hydrogels are an ideal medium for the expansion of cells in three dimensions. The ability to induce cell expansion and differentiation in a controlled manner is a key goal in tissue engineering. Here we describe a detailed method for producing hydrogels from soft tissues with an emphasis on adipose tissue. In this method, soluble, extractable proteins are recovered from the tissue and stored while the remaining insoluble tissue is processed and solubilised. Once the tissue has been sufficiently solubilised, the extracted proteins are added. The resulting product is a thermosensitive hydrogel ...
[摘要] 水凝胶是三维细胞扩增的理想媒介。以受控方式诱导细胞扩增和分化的能力是组织工程中的关键目标。在这里，我们描述了从软组织生产水凝胶的详细方法，重点是脂肪组织。在该方法中，可溶性可提取蛋白从组织中回收并储存，而剩余的不溶组织被加工和溶解。一旦组织被充分溶解，就加入提取的蛋白质。所得产物是具有代表天然组织的蛋白质的热敏水凝胶。这种方法解决了在使用某些生物材料时遇到的常见问题，例如高脂质含量，DNA污染和找到适当的灭菌方法。尽管本文的重点是脂肪组织，但使用这种方法，我们已经从其他软组织（包括肌肉，肝脏和心脏组织）中产生了水凝胶。
背景 组织工程的主要目标是通过向身体提供具有与目标部位相似性质的支架来产生新的组织。这允许最佳的重塑并且使得能够形成新生内源性组织。在脂肪组织工程领域，来自脂肪组织的生物材料是特别有意义的，因为脂肪组织广泛可用，并且在理论上为脂肪形成诱导提供了最佳可能的环境（Flynn等人，2007; Flynn，2010; Uriel等人，2008; Choi等人，2009; Young等人，2011）。已经确定脂肪细胞分泌脂肪形成因子（Li et al。，1998; Shillabeer等人，1989; Shillabeer等人， ...
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| Expression, Purification and Crystallization of the Herpesvirus Nuclear Egress Complex (NEC)
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Author:
Date:
2016-07-20
[Abstract] The protocol describes the production and crystallization of the soluble form of the nuclear egress complex (NEC) from Herpes simplex virus 1 and Pseudorabies virus. The NEC is a heterodimer that consists of conserved proteins UL31 and UL34. NEC oligomerization deforms the inner nuclear membrane around the capsid in infected cells, thereby mediating capsid budding into the perinuclear space during nuclear egress. We have successfully developed a protocol for large-scale preparation of highly pure NEC from two different viruses in a prokaryotic expression system, which enabled us to ...
[摘要] 该协议描述了来自单纯疱疹病毒1和伪狂犬病病毒的核出口复合物（NEC）的可溶形式的产生和结晶。 NEC是由保守蛋白UL31和UL34组成的异源二聚体。 NEC低聚使受感染细胞中的衣壳周围的内核膜变形，从而在核出口期间介导衣壳发芽进入核周空间。 我们已经成功地开发了一个协议，从大规模制备高纯度NEC从两种不同的病毒在原核表达系统，这使我们能够结晶这些病毒蛋白复合物和确定其结构。 该程序可适于纯化和结晶其它可溶性蛋白质复合物。
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