| Enzymatic Assays and Enzyme Histochemistry of Tuta absoluta Feeding on Tomato Leaves
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Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract] Enzymes play a key role in insect-plant relationships. For a better understanding of these interactions, we analyzed Tuta absoluta digestive enzymes. Here, we describe a detailed protocol for the detection of trypsin and papain-like enzymes in Tuta absoluta larvae by enzyme histochemistry. This assay uses frozen and unfixed samples to avoid the loss of enzymatic activity. We also describe a protocol for the quantification of trypsin and papain-like enzymes in the larvae of Tuta absoluta at different developmental instars.
[摘要] 酶在昆虫植物关系中起着关键作用。 为了更好地理解这些相互作用，我们分析了 Tuta absoluta 消化酶。 在这里，我们描述了通过酶组织化学检测 Tuta absoluta 幼虫中的胰蛋白酶和木瓜蛋白酶样酶的详细方案。 该测定使用冷冻和未固定的样品以避免酶活性的丧失。 我们还描述了在不同发育期的 Tuta absoluta 幼虫中量化胰蛋白酶和木瓜蛋白酶样酶的方案。
【背景】植物和昆虫共存了数百万年，并进化出一系列相互作用，影响不同水平的生物。昆虫设法发展不同的生理和形态适应，以克服植物防御机制。因此，更好地了解其重要功能将有助于其有针对性的控制。昆虫的不同生理功能依赖于酶：消化，呼吸，循环，肌肉，神经，生殖和内分泌。几种酶参与消化。蛋白酶如胰蛋白酶，胰凝乳蛋白酶，胃蛋白酶或羧肽酶是蛋白质消化的原因，蛋白质消化是昆虫的氨基酸来源。因此，消化蛋白酶抑制剂已被成功用于提高植物对昆虫的抗性（Smigocki et al。，2013; Quilis et al。，2014; Hamza et al ...
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| Extraction and Quantification of Polyphosphate in the Budding Yeast Saccharomyces cerevisiae
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Author:
Date:
2016-07-20
[Abstract] Inorganic polyphosphate (polyP) is a linear polymer present in both prokaryotic and eukaryotic organisms and made from three to hundreds of orthophosphate residues linked by phosphoanhydride bonds. The biological role of this molecule goes beyond serving as Pi store or energy source to replace ATP. For instance, in yeast polyP levels have been related to stress adaptation and this molecule has been shown to be the substrate for polyphosphorylation of proteins. Here we describe two different methods to purify polyP from the yeast Saccharomyces cerevisiae and the subsequent protocol to ...
[摘要] 无机多磷酸盐（polyP）是存在于原核和真核生物中的线性聚合物，由通过磷酸酐键连接的三至数百个正磷酸盐残基制成。 这种分子的生物学作用超越了作为P 1储存或能量源以代替ATP。 例如，在酵母中，polyP水平与应激适应相关，并且该分子已经显示为蛋白质多磷酸化的底物。 在这里，我们描述了从酵母酿酒酵母中纯化polyP的两种不同方法和随后的通过分光光度法测量在酶水解纯化的polyP时产生的Pi来定量polyP水平的方案。 必须注意的是，所使用的纯化方案极大地影响所获得的polyP值。
图1. polyP的酶水解
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