| Induction of Natural Competence in Genetically-modified Lactococcus lactis
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] Natural competence can be activated in Lactoccocus lactis subsp lactis and cremoris upon overexpression of ComX, a master regulator of bacterial competence. Herein, we demonstrate a method to activate bacterial competence by regulating the expression of the comX gene by using a nisin-inducible promoter in an L. lactis strain harboring either a chromosomal or plasmid-encoded copy of nisRK. Addition of moderate concentrations of the inducer nisin resulted in concomitant moderate levels of ComX, which led to an optimal transformation rate ...
[摘要] 在过度表达细菌能力的主要调节因子ComX后，天然能力可以在乳酸乳球菌亚种乳酸和 cremoris 中激活。 在本文中，我们展示了通过在 L中使用乳链菌肽诱导型启动子调节 comX 基因的表达来激活细菌能力的方法。 含有 nisRK 的染色体或质粒编码拷贝的lactis 菌株。 加入中等浓度的诱导剂乳链菌肽导致伴随的中等水平的ComX，其导致最佳转化率（1.0×10 2 sup / -6>转化子/总细胞数/ g质粒DNA）。 在此，提出了用于能力归纳的优化协议的详细描述。
【背景】自然能力是细菌通过专门的摄取机制获得外源DNA的过程，之后内化的DNA整合到其基因组中或作为质粒DNA维持。一些细菌在特定的环境触发因素如基因毒性应激或饥饿时进入能力状态（Seitz和Blokesch，2013; Blokesch，2016）。群体感应系统，如 comCDE 或 comRS ，控制着革兰氏阳性菌的自然能力的激活（Håvarstein et al。，1995; Pestova et al。，1996; Kleerebezem et al。，1997b; Fontaine et al。，2015）。更具体地说， comC 和 comS 编码信息素，而 comD 编码组氨酸激酶和 comE 和 comR 编码响应调节器（Håvarstein et al。，1995; ...
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| Extraction and Quantification of Polyphosphate in the Budding Yeast Saccharomyces cerevisiae
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Author:
Date:
2016-07-20
[Abstract] Inorganic polyphosphate (polyP) is a linear polymer present in both prokaryotic and eukaryotic organisms and made from three to hundreds of orthophosphate residues linked by phosphoanhydride bonds. The biological role of this molecule goes beyond serving as Pi store or energy source to replace ATP. For instance, in yeast polyP levels have been related to stress adaptation and this molecule has been shown to be the substrate for polyphosphorylation of proteins. Here we describe two different methods to purify polyP from the yeast Saccharomyces cerevisiae and the subsequent protocol to ...
[摘要] 无机多磷酸盐（polyP）是存在于原核和真核生物中的线性聚合物，由通过磷酸酐键连接的三至数百个正磷酸盐残基制成。 这种分子的生物学作用超越了作为P 1储存或能量源以代替ATP。 例如，在酵母中，polyP水平与应激适应相关，并且该分子已经显示为蛋白质多磷酸化的底物。 在这里，我们描述了从酵母酿酒酵母中纯化polyP的两种不同方法和随后的通过分光光度法测量在酶水解纯化的polyP时产生的Pi来定量polyP水平的方案。 必须注意的是，所使用的纯化方案极大地影响所获得的polyP值。
图1. polyP的酶水解
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