| An in vitro Co-culture System for the Activation of CD40 by Membrane-presented CD40 Ligand versus Soluble Agonist
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] One fundamental property of the TNR receptor (TNFR) family relates to how ‘signal quality’ (the extent of receptor ligation or cross-linking) influences the outcome of receptor ligation, for instance the induction of death in tumour cells. It is unequivocal that membrane-presented ligand (delivered to target cells via cell-surface presentation by co-culture with ligand-expressing third-party cells) induces a greater extent of carcinoma cell death in vitro in comparison to non-cross-linked agonists (agonistic antibodies and/or recombinant ligands). The CD40 receptor epitomises this ...
[摘要] TNR受体（TNFR）家族的一个基本特性涉及“信号质量”（受体连接或交联的程度）如何影响受体连接的结果，例如肿瘤细胞中的死亡诱导。毫无疑问，膜呈递配体（通过与表达配体的第三方细胞共培养通过细胞表面呈递递送至靶细胞）在体外诱导更大程度的癌细胞死亡非交联激动剂（激动性抗体和/或重组配体）。 CD40受体集中体现了TNF受体 - 配体相互作用的这种基本特性，因为CD40交联的程度决定了细胞命运。膜呈递CD40配体（mCD40L），但不是可溶性激动剂（例如，激动性抗CD40抗体），诱导高水平的促炎细胞因子分泌并导致恶性肿瘤细胞广泛死亡（细胞凋亡）但不是正常的）上皮细胞。在本文中，我们描述了通过mCD40L激活CD40并随后检测细胞凋亡的各种特征（包括细胞膜透化，DNA片段化，半胱天冬酶活化）以及细胞内细胞死亡介质检测的共培养系统（包括衔接蛋白，促凋亡激酶和活性氧，ROS）。
【背景】TNFR及其配体在调节淋巴组织以及上皮（尤其是癌）细胞中的细胞增殖或死亡中的作用已经在广泛研究中，因为它们诱导细胞死亡（主要通过细胞凋亡）的能力代表了有希望的目标。用于癌症治疗。然而，重要的是，当以可溶性对膜结合形式存在时，TNFR激动剂引发细胞死亡的能力存在明显差异。当作为单独治疗施用时，可溶性激动剂通常表现出相对低的细胞毒性效力，而膜呈递的配体似乎是优越的（Albarbar ...
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| Intracellular and Mitochondrial Reactive Oxygen Species Measurement in Primary Cultured Neurons
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Author:
Seung Hyun Baek, Yoonsuk Cho, Jeongmi Lee, Bo Youn Choi, Yuri Choi, Jin Su Park, Harkkyun Kim, Jaehoon Sul, Eunae Kim, Jae Hyung Park and Dong-Gyu Jo,
Date:
2018-06-05
[Abstract] Reactive oxygen species (ROS) are chemically reactive oxygen containing molecules. ROS consist of radical oxygen species including superoxide anion (O2•−) and hydroxyl radical (•OH) and non-radical oxygen species such as hydrogen peroxide (H2O2), singlet oxygen (O2). ROS are generated by mitochondrial oxidative phosphorylation, environmental stresses including UV or heat exposure, and cellular responses to xenobiotics (Ray et al., 2012). Excessive ROS production over cellular antioxidant capacity induces oxidative stress which ...
[摘要] 活性氧物质（ROS）是化学活性的含氧分子。 ROS由自由基氧物种组成，包括超氧化物阴离子（O2-）和羟基自由基（·OH）以及非自由基氧物种如过氧化氢（H
【背景】ROS对维持我们体内的稳态很重要（Brieger等人，2012年）。许多疾病如癌症，神经退行性疾病，心血管疾病和糖尿病与ROS有关（Datta等人，2000）。由ROS引起的DNA损伤是加速癌变过程的主要原因，并且已经积极开发靶向ROS的治疗剂（Trachootham等人，2009）。在循环系统中，异常的氧化应激增加ROS的产生，导致各种心血管疾病（Forstermann，2008）。与糖尿病有关的信号对ROS敏感，并且由异常水平ROS引起的这些信号异常导致糖尿病并发症（Baek等人，2017）。控制大脑中的ROS水平是最重要的活动之一，因为异常水平的ROS会导致多种脑部疾病。被称为阿尔茨海默病重要因素的淀粉状蛋白β导致脑中过量的ROS生成，神经元损伤（Singh等，2011），最终导致痴呆（Polidori，2004）。由活性氧产生的活性小胶质细胞分泌各种细胞因子导致神经元死亡（Heneka等人，2014）。
ROS是由线粒体中消耗的一小部分氧产生的。线粒体中产生的ROS的主要种类是超氧化物阴离子，它是电子传递链的副产物（Batandier等人，2002）。为了检测线粒体中的超氧化物，使用MitoSOX红色，线粒体超氧化物指示剂。由于三苯基鏻基团带正电，MitoSOX红可以有效地穿透磷脂双分子层，并积聚在线粒体基质中。此外，MitoSOX红的氢化乙啶可使研究人员区分超氧化物介导的氧化产物与其他非特异性信号产生的荧光信号（Robinson等人，2006; ...
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| Measurement of ROS in Caenorhabditis elegans Using a Reduced Form of Fluorescein
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] Oxidative stress is implicated in the pathogenesis of various neurodegenerative diseases, including Alzheimer’s disease. Oxidative stress is a result of a disruption of the equilibrium between antioxidants and oxidants, in favor of oxidants. Since mitochondria are major sites of production and reduction of reactive oxygen species (ROS), measurement of ROS levels can help us determine if mitochondrial functional integrity has been compromised. In this protocol, we describe a method to measure the level of ROS in the nematode Caenorhabditis elegans, using ...
[摘要] 氧化应激涉及各种神经退行性疾病的发病机制，包括阿尔茨海默病。 氧化应激是抗氧化剂和氧化剂之间平衡中断的结果，有利于氧化剂。 由于线粒体是主要的产生和活性氧（ROS）减少的部位，ROS水平的测量可帮助我们确定线粒体功能完整性是否受到损害。 在该协议中，我们描述了使用氯甲基-2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯（CM-H 2），测量线虫秀丽隐杆线虫中ROS的水平的方法，DCFDA）。
【背景】ROS的生命周期与线粒体密切相关。超氧化物是由于线粒体中电子传递链的复合物I和复合物III不可避免地发生电子泄漏而产生的。这种超氧化物然后在线粒体基质和线粒体膜间隙中被过氧化氢歧化。通过这些过程产生的超氧化物和过氧化氢被认为是ROS，其中线粒体负责90％的内源性ROS（Balaban等人，2005）。因此，测量ROS水平将提供对线粒体健康状况的了解。在这里，我们提供了一个协议来确定线虫中的ROS水平。使用CM-H 2 DCFDA（一种还原形式的荧光素的渗透细胞氯甲基衍生物）的线虫。一旦进入细胞内，CM-H 2 DCFDA被细胞内酯酶切割，并且由ROS产生的氧化产生的非荧光H 2 DCF被转化为高度荧光的2 '，7'-二氯荧光素（DCF）。活体C中H 2 DCFDA的荧光强度的成像和测量。 elegans ...
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