| Liposome Flotation Assay for Studying Interactions Between Rubella Virus Particles and Lipid Membranes
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Rubella virus (RuV) is an enveloped, positive-sense single-stranded RNA virus that is pathogenic to humans. RuV binds to the target cell via the viral envelope protein E1, but the specific receptor molecules on the target cell are yet to be fully elucidated. Here, we describe a protocol for liposome flotation assay to study direct interactions between RuV particles and lipid membranes in a qualitative manner. Interactions are examined by a Nycodenz density gradient fractionation using UV-inactivated RuV particles and fluorescent-labeled liposomes consisting of pure lipids. Fractionated RuV ...
[摘要] 风疹病毒（RuV）是一种包膜的正义单链RNA病毒，对人类具有致病性。 RuV通过病毒包膜蛋白E1与靶细胞结合，但靶细胞上的特异性受体分子尚未完全阐明。在这里，我们描述了脂质体浮选测定的方案，以定性方式研究RuV颗粒和脂质膜之间的直接相互作用。使用UV-灭活的RuV颗粒和由纯脂质组成的荧光标记的脂质体通过Nycodenz密度梯度分级检查相互作用。使用标准十二烷基硫酸钠 - 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测分级的RuV颗粒，然后对病毒蛋白进行Western印迹分析。在Nycodenz梯度上，与未结合的RuV颗粒相比，与脂质体结合的RuV颗粒转移至较低密度的部分。使用该方案，我们提供了令人信服的证据，即在中性pH下以钙依赖性方式，RuV颗粒与某些细胞类型中含有鞘磷脂（SM）和胆固醇的脂质膜结合。
【背景】 风疹病毒是“风疹”的致病因子，“风疹”是一种急性且相对轻微的全身性感染和“先天性风疹综合征”，一种导致严重出生缺陷的转胎胎儿感染（Hobman，2013）。阐明RuV进入的分子机制对于了解病毒病理学和帮助开发抗RuV药物是必不可少的。虽然以前的研究表明宿主细胞的膜脂质作为RuV受体（Mastromarino et al。，1989和1990; DuBois et ...
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| Purification of Flagellin from Acidovorax avenae and Analysis of Plant Immune Responses Induced by the Purified Flagellin
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Date:
2016-08-20
[Abstract] Plants sense potential pathogens by recognizing conserved pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) that cause PAMP-triggered immunity (PTI) including the generation of reactive oxygen species, callose deposition, and expression of several PTI-related genes. Acidovorax avenae is a Gam-negative bacterium that causes a seedling disease characterized by the deposition of brown stripes on the sheaths of infected plants. We previously reported that flagellin isolated from the rice avirulent A. avenae N1141 strain induces PTI, while flagellin isolated from the rice virulent A. ...
[摘要] 植物通过识别引起PAMP触发的免疫（PTI）的保守的病原体相关分子模式（PAMP）来感测潜在的病原体，包括活性氧的产生，胼lose质沉积和几个PTI相关基因的表达。 酸性弧菌是一种革兰氏阴性细菌，其导致幼苗疾病，其特征在于在感染的植物的鞘上沉积棕色条纹。 我们以前报告了从无毒力的大米中分离的鞭毛蛋白。 avenae N1141菌株诱导PTI，而从水稻毒力分离的鞭毛蛋白。 avenae K1株不诱导PTI。 为了检查N1141鞭毛蛋白的特异性PTI诱导的分子机制，需要来自N1141或K1菌株的高度纯化的鞭毛蛋白。 在这里，我们描述了一种高质量的纯化方法。 avenae鞭毛蛋白，并用于PTI诱导研究。
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| Surface Plasmon Resonance Analysis of Antigen-Antibody Interaction
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Author:
Date:
2013-12-20
[Abstract] Molecular interaction between monoclonal antibodies (MAbs) and their recognized antigen is a fundamental event leading to the neutralization activity. Estimation of their binding affinity gives beneficial information to characterize the MAbs and to develop more effective MAbs. Surface plasmon resonance (SPR) analysis is a powerful tool to analyze the molecular interaction, enabling rapid and repetitive estimation with relatively small amount of sample. Here we describe a general protocol about SPR analysis on the interaction between viral antigen and human MAb (HuMAb) IgG. Anti-human Fcγ is ...
[摘要] 单克隆抗体（MAb）与其识别的抗原之间的分子相互作用是导致中和活性的基本事件。 它们的结合亲和力的估计给出了表征MAb和产生更有效的MAb的有益信息。 表面等离子体共振（SPR）分析是分析分子相互作用的有力工具，使得能够用相对少量的样品进行快速和重复的估计。 在这里我们描述关于病毒抗原和人类MAb（HuMAb）IgG之间的相互作用的SPR分析的一般协议。 抗人Fcγ首先通过胺偶联在传感器芯片上共价交联，然后通过抗FcγMAbIgG相互作用作为配体固定目标HuMAb。 注射在传感器芯片上的抗原导致作为结合和解离的结果的时间过程中的SPR变化。 通过分析动力学，获得结合速率，解离速率和解离常数。
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