| A Streamlined Method for the Preparation of Growth Factor-enriched Thermosensitive Hydrogels from Soft Tissue
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Author:
Date:
2017-02-05
[Abstract] Hydrogels are an ideal medium for the expansion of cells in three dimensions. The ability to induce cell expansion and differentiation in a controlled manner is a key goal in tissue engineering. Here we describe a detailed method for producing hydrogels from soft tissues with an emphasis on adipose tissue. In this method, soluble, extractable proteins are recovered from the tissue and stored while the remaining insoluble tissue is processed and solubilised. Once the tissue has been sufficiently solubilised, the extracted proteins are added. The resulting product is a thermosensitive hydrogel ...
[摘要] 水凝胶是三维细胞扩增的理想媒介。以受控方式诱导细胞扩增和分化的能力是组织工程中的关键目标。在这里，我们描述了从软组织生产水凝胶的详细方法，重点是脂肪组织。在该方法中，可溶性可提取蛋白从组织中回收并储存，而剩余的不溶组织被加工和溶解。一旦组织被充分溶解，就加入提取的蛋白质。所得产物是具有代表天然组织的蛋白质的热敏水凝胶。这种方法解决了在使用某些生物材料时遇到的常见问题，例如高脂质含量，DNA污染和找到适当的灭菌方法。尽管本文的重点是脂肪组织，但使用这种方法，我们已经从其他软组织（包括肌肉，肝脏和心脏组织）中产生了水凝胶。
背景 组织工程的主要目标是通过向身体提供具有与目标部位相似性质的支架来产生新的组织。这允许最佳的重塑并且使得能够形成新生内源性组织。在脂肪组织工程领域，来自脂肪组织的生物材料是特别有意义的，因为脂肪组织广泛可用，并且在理论上为脂肪形成诱导提供了最佳可能的环境（Flynn等人，2007; Flynn，2010; Uriel等人，2008; Choi等人，2009; Young等人，2011）。已经确定脂肪细胞分泌脂肪形成因子（Li et al。，1998; Shillabeer等人，1989; Shillabeer等人， ...
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| Substrate Specificity of Recombinant Ser/Thr Protein Kinase
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Author:
Date:
2015-03-20
[Abstract] Protein kinases are enzymes that phosphorylate proteins in a cell. Determination of kinase activity in reactions of phosphorylation is a very convenient way for a biochemical characterization of this group of enzymes. Here we describe a method to determine the activity of a recombinant Ser/Thr protein kinase using as a possible substrate MBP, H1, and BSA.
[摘要] 蛋白激酶是磷酸化细胞中蛋白质的酶。 磷酸化反应中激酶活性的测定是这组酶的生物化学表征的非常方便的方法。 在这里，我们描述了一种使用可能的底物MBP，H1和BSA确定重组Ser/Thr蛋白激酶活性的方法。
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| Membrane Preparation, Sucrose Density Gradients and Two-phase Separation Fractionation from Five-day-old Arabidopsis seedlings
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Author:
Date:
2013-12-20
[Abstract] Membrane preparation has been widely used for characterization the membrane proteins. Membrane fractions can be separated by a combination of differential and density-gradient centrifugation techniques (Hodges et al., 1972; Leonard and Vanderwoude, 1976). Here we firstly describe a method to isolate total microsomal fractions including plasma membrane, intracellular vesicles, Golgi membranes, endoplasma reticulum, and tonoplast (vacuolar membrane) from 5-7 days old seedlings, which is often analyzed for auxin transporters in Arabidopsis (Leonard and Vanderwoude, 1976; ...
[摘要] 膜制备已广泛用于表征膜蛋白。膜级分可以通过差示和密度梯度离心技术的组合来分离（Hodges等人，1972; Leonard和Vanderwoude，1976）。在这里我们首先描述一种从5-7天龄幼苗中分离总微粒体级分包括质膜，胞内囊泡，高尔基体膜，内质网和液泡膜（液泡膜）的方法，其通常在拟南芥中分析生长素转运蛋白（Leonard和Vanderwoude，1976; Titapiwatanakun，，2009; Yang等人，2013; Blakeslee等人 >，2007）。均化后，通过低速离心（8,000×g）除去包括细胞壁，叶绿体和细胞核的植物碎片，然后通过高速离心（10,000×g/ml）沉淀总微粒体膜， ）并与可溶性级分分离。我们第二次描述了通过离心在蔗糖密度梯度系统中根据大小或密度分离微粒体部分的方法。使用20％-55％（1.09-1.26g cm -3）的线性蔗糖梯度分离具有不同密度的膜：tonoplast，1.10-1.12cm 3 - ，高尔基体膜，1.12-1.15cm 3，粗糙的内质网1.15-1.17cm 3，类囊体，1.16-1.18cm 3 - ，质膜，1.14-1.17g cm -3 - 和线粒体膜，1.18-1.20cm -3（Leonard和Vanderwoude，1976; Larsson等人， ，1987; Briskin and ...
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