| Leaf Clearing Protocol to Observe Stomata and Other Cells on Leaf Surface
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Author:
Date:
2017-09-05
[Abstract] In this protocol, leaves are cleared and fixed in an ethanol and acetic acid solution, and mounted in Hoyer’s solution. The cleared leaves are imaged under differential interference contrast (DIC) microscope. This protocol is beneficial for studying stomata, hair cells, and other epidermal cells in plants.
[摘要] 在该方案中，将叶子清除并固定在乙醇和乙酸溶液中，并安装在Hoyer溶液中。 清除的叶片在差分干涉对比（DIC）显微镜下成像。 该方案有利于研究植物中的气孔，毛细胞和其他表皮细胞。
【背景】观察气孔和其他表皮细胞如植物叶片表面毛细胞有多种方法。 传统上，将明亮的指甲油或木胶施加到叶子表面并使其干燥。 将叶片剥离并在显微镜下观察。 或者，将透明胶带施加到叶子上并去除以观察叶表面的印记。 这些传统方法可用于坚固的较厚的叶子，但是图像通常不是最高质量的。 小而脆弱的叶如拟南芥叶需要更先进的方法。 还可以在显微镜下直接观察到新鲜的拟南芥或Brachypodium叶。 然而，叶片中的厚度和颜料在观察气孔和其他表皮细胞方面是困难的。 该协议描述了一种清除叶片，用于可视化包括其他表皮细胞在内的气孔的方法，并且获得了在同行评审期刊中出版的优质图像（Anderson，1954）。
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| A Co-culture Model for Determining the Target Specificity of the de novo Generated Retinal Ganglion Cells
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] In glaucoma, the output neurons of the retina, the retinal ganglion cells (RGCs), progressively degenerate, leading to irreversible blindness (Ahram et al., 2015). The ex vivo stem cell method to replace degenerated RGCs remains a potentially viable approach (Levin et al., 2004). However, the success of the approach depends upon the ability of the de novo generated RGCs to connect over the long distance with specific targets in the central visual pathway. Here, we describe a protocol to examine the target specificity of the de novo generated RGCs ...
[摘要] 在青光眼中，视网膜的输出神经元，视网膜神经节细胞（RGC）逐渐退化，导致不可逆的失明（Ahram等人，2015）。 替代退化RGCs的离体干细胞方法仍然是潜在可行的方法（Levin等人，2004）。 然而，该方法的成功取决于生成RGC的远程连接与中心视觉通路中特定目标的能力。 在这里，我们描述了一种协议，用于使用共培养方法来检查产生RG的产生RGCs的靶特异性，其中RGCs神经突被允许在特异性（上丘（SC））和非特异性 （下丘，IC）构造目标。
青光眼是全球不可逆失明的最常见原因之一（Tham等人，2014）。其特征在于RGC的进行性退化，视网膜的主要输出神经元，其与大脑连接用于视觉感知。不幸的是，目前尚无治疗RGCs变性的治疗方法。无论是外科手术，药理学还是神经保护，管理方法都不能扭转退行性变化（Danesh-Meyer，2011）。鉴于这种棘手的情况，干细胞治疗已经成为替代死亡RGCs的潜在可行方法。这种方法的成功需要：1）功能性和非致瘤性RGC与多能干细胞的定向分化，以及2）产生RGC的新生靶标特异性。我们的实验室最近展示了一种化学定义的方法，通过重述发育机制（Teotia等人，2016），允许RGCs从胚胎干（ES）/诱导的多能干细胞（iPS）细胞中的定向分化。所得的RGC是稳定的，功能性的和非致瘤性的。然而，远离干细胞在青光眼RGC变性中的生物细胞的成功取决于它们的轴突在中心视觉途径中找到适当靶标的能力。移植后，RGC的轴突必须在视网膜内导航，作为视神经退出，决定在视交叉处交叉或不交叉，并达到建立视网膜连接的具体目标。我们已经证明ES ...
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| Affymetrix Genome-wide Human SNP Assay
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Author:
Date:
2016-05-20
[Abstract] To assess genomic variation, it is possible to identify the single nucleotide polymorphisms (SNP) which an individual carries. Using the Affymetrix Genome-wide Human SNP Assay, it is possible to assess 906,600 SNPs on a single array. This protocol, the next iteration of the GeneChip Mapping 500K array set, is based directly on the manufacturers’ protocol and shows steps which are highly similar to that which is found here: http://media.affymetrix.com/support/downloads/manuals/genomewidesnp6_manual.pdf. ...
[摘要] 为了评估基因组变异，可以鉴定个体携带的单核苷酸多态性（SNP）。 使用Affymetrix全基因组人类SNP测定，可以在单个阵列上评估906,600个SNP。 这个协议是GeneChip Mapping 500K数组集的下一个迭代，它直接基于制造商的协议，并显示了与这里非常相似的步骤：http://media.affymetrix.com/support/downloads/manuals/genomewidesnp6_manual.pdf 。
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