| Detection of ASC Oligomerization by Western Blotting
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] The apoptosis-associated speck-like protein with a caspase-recruitment domain (ASC) adaptor protein bridges inflammasome sensors and caspase-1. Upon inflammasome activation, ASC nucleates in a prion-like manner into a large and single platform responsible for the recruitment and the activation of caspase-1. Active caspase-1 will in turn promote the proteolytic maturation of the pro-inflammatory cytokine IL-1β. ASC oligomerization is direct evidence for inflammasome activation and its detection allows a read-out independent of caspase-1 and IL-1β. This protocol describes how to detect the ...
[摘要] 具有半胱天冬酶募集区（ASC）衔接蛋白的凋亡相关斑点样蛋白桥联炎症体传感器和半胱天冬酶-1。在炎性体活化后，ASC以类似朊病毒的方式成核，成为负责募集和激活半胱天冬酶-1的大而单一的平台。活性胱天蛋白酶-1将反过来促进促炎细胞因子IL-1β的蛋白水解成熟。 ASC寡聚化是炎性体激活的直接证据，其检测允许读取与caspase-1和IL-1β无关。该方案描述了如何通过蛋白质印迹检测ASC的寡聚化。
背景 Inflammasomes是大量的多蛋白平台，其感测各种微生物，内源和环境胁迫因子，导致促炎IL-1细胞因子家族的成熟（Martinon等人，2002; Sharma和Kanneganti， 2016）。激活后，炎性细胞传感器通过pyrin结构域（PYD）-PYD同型相互作用募集衔接蛋白ASC。 ASC通过胱天蛋白酶激活和募集域（CARD）-CARD相互作用又结合半胱天冬酶-1，并有利于caspase-1的自我蛋白水解切割，导致IL-1β和IL-18的成熟（Hoss等人。，2016）。 Inflammasome激活引发ASC二聚体的超分子寡聚化成称为“ASC-specks”或“pyroptosome”（Fernandes-Alnemri等人，2007）的大交织原纤维。 ASC-speck / ...
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| Protocol for Murine/Mouse Platelets Isolation and Their Reintroduction in vivo
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Author:
Date:
2017-02-20
[Abstract] Platelets and coagulation have long been known to be essential for metastasis in experimental models. In order to study the interactions between tumor cells, platelets and endothelium, we have adapted methods used in coagulation research for the isolation of platelets and their reintroduction into mice. Anti-coagulated murine blood served as the source for platelets. Platelets were separated from other elements of the whole blood by centrifugation. Here the critical elements are first inhibition of coagulation and second isolation and maintenance of the platelets in the presence of inhibitors ...
[摘要] 长期以来，已知血小板和凝血酶在实验模型中对转移至关重要。为了研究肿瘤细胞，血小板和内皮之间的相互作用，我们采用了凝血研究中用于分离血小板及其再引入小鼠的适应方法。抗凝血鼠血液作为血小板的来源。通过离心将血小板与全血的其它元素分离。这里的关键因素是在存在血小板活化抑制剂的情况下首先抑制凝血和血小板的第二次分离和维持。然后用生物染料PKH26荧光标记血小板。这些标记血小板的输注允许显微观察引入的血小板。重新引入后，这些血小板看起来正常起作用，占总血小板的约50％。因为它们是荧光标记的，所以它们很容易被识别。最后，可以使用这些方法通过使用来自基因工程小鼠的血小板来确定改变的基因表达在血小板中的特异性效应。这些方法有助于研究组织培养和鼠模型中血小板和肿瘤细胞之间的相互作用。它们也适用于视频显微镜。在这里，我们提供了我们用于小鼠血小板分离的方法的细节，以及它们的染色用于进一步的显微镜和重新引入小鼠。
背景 已知血小板对于转移是必需的，而且在肿瘤生长期间也起作用，更不用说凝块形成。为了容易识别和追踪血小板，我们开发了荧光标记和再灌注血小板的手段。这使得它们可以容易地在不需要免疫染色的组织中鉴定。使用这些方法，我们显示肿瘤细胞和血小板之间的相互作用在转移早期在肿瘤细胞的存活中起关键作用（Im等人，2004; ...
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| Generation of Aβ-specific T cell lines and in vivo Transfer
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Author:
Date:
2014-09-20
[Abstract] Amyloid-β (Aβ)-containing plaques accumulate in the brains of patients with Alzheimer’s disease (AD). Studies in transgenic mice which over-express amyloid precursor protein and presenilin 1 (APP/PS1 mice) have suggested that T cells that infiltrate the brain may influence the development of Aβ plaques and associated cognitive dysfuncation. Active immunization with Aβ peptides and adjuvants has been evaluated as a therapy for AD, based on the premise that it induces Aβ-specific antibodies that may help to clear the Aβ plaques. However, immunization with Aβ peptides and adjuvants also promotes ...
[摘要] 含有淀粉样蛋白β（Aβ）的斑块积聚在患有阿尔茨海默病（AD）的患者的脑中。过表达淀粉样蛋白前体蛋白和早老蛋白1（APP/PS1小鼠）的转基因小鼠的研究已经表明浸润大脑的T细胞可能影响Aβ斑块和相关认知功能障碍的发展。使用Aβ肽和佐剂的主动免疫已被评估为AD的治疗，基于其诱导可能有助于清除Aβ斑块的Aβ特异性抗体的前提。然而，用Aβ肽和佐剂免疫也促进Aβ特异性T细胞的发展（McQuillan等人，2010），并且有证据表明Aβ特异性T细胞可能影响Aβ斑块的发展和AD患者的疾病进展。在小鼠模型中，分泌IFN-γ（Th1细胞）的Aβ特异性T细胞已显示增强斑块负荷（Browne等人，2013）。已经在体外极化为Th1，Th2，Th17或Treg细胞的Aβ特异性T细胞的过继转移可用于体内检查这些细胞的功能。
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