| A Novel Protocol to Quantitatively Measure the Endocytic Trafficking of Amyloid Precursor Protein (APP) in Polarized Primary Neurons with Sub-cellular Resolution
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Alzheimer’s disease’s established primary trigger is β-amyloid (Aβ) (Mucke and Selkoe, 2012). The amyloid precursor protein (APP) endocytosis is required for Aβ generation at early endosomes (Rajendran and Annaert, 2012). APP retention at endosomes depends on its sorting for degradation in lysosomes (Haass et al., 1992; Morel et al., 2013; Edgar et al., 2015; Ubelmann et al., 2017). The following endocytosis assay has been optimized to assess the amyloid precursor protein (APP) endocytosis and degradation by live murine cortical primary neurons (Ubelmann et ...
[摘要] 阿尔茨海默病确定的主要触发因素是β-淀粉样蛋白（Aβ）（Mucke和Selkoe，2012）。 淀粉样蛋白前体蛋白（APP）内吞作用是在早期内体中产生Aβ所必需的（Rajendran和Annaert，2012）。 内涵体上的APP保留取决于其对溶酶体中的降解的分选（Haass等人，1992; Morel等人，2013; Edgar等人， 2015年; Ubelmann等人，2017年）。 已经优化了以下内吞作用测定法以评估活的小鼠皮层原代神经元的淀粉状蛋白前体蛋白（APP）内吞作用和降解（Ubelmann等人，2017）。
【背景】Aβ42积聚是阿尔茨海默病的主要触发因素。 APP的胞吞作用需要Aβ42代（辜和Squazzo，1994; Grbovic 等人，2003; Cirrito 等人，2008;拉金德伦等人，2008）。已经通过表面蛋白的经典生物素化在脉冲追踪动力学实验中分析了APP的内吞作用（Sannerud等人，2011; Xiao等人，2012; Sullivan等人，2014），在单细胞中通过使用针对APP的N-末端胞外结构域的抗体（Yamazaki等人，1995; Xiao ，2012）。这些研究中的大多数使用非神经元细胞（Yamazaki等人，1996; Lee等人，2008; Sullivan等人， ...
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| Measuring the Endocytic Recycling of Amyloid Precursor Protein (APP) in Neuro2a Cells
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] The established primary trigger of Alzheimer’s disease’s is β-amyloid (Aβ) (Mucke and Selkoe, 2012). Amyloid precursor protein (APP) endocytosis is required for Aβ generation at early endosomes (Rajendran and Annaert, 2012). APP retention at endosomes also depends on its recycling back to the plasma membrane (Koo et al., 1996; Ubelmann et al., 2017). The following recycling assay has been optimized to assess APP recycling by live murine Neuro2a cells, a neuroblastoma cell line (Ubelmann et al., 2017).
[摘要] 已确定的阿尔茨海默病的主要诱因是β-淀粉样蛋白（Aβ）（穆克和Selkoe，2012）。淀粉样蛋白前体蛋白（APP）胞吞作用是早期内涵体产生Aβ所必需的（核内体中的APP保留还取决于其回到质膜的再循环（Koo等人，1996; Rajendran和Annaert，2012）。 Ubelmann等人，2017）。已经优化了以下回收测定法以评估活的小鼠神经母细胞瘤细胞系具有Neuro2a细胞（Ubelmann等人，2017）的APP回收。
【背景】Aβ42积聚是阿尔茨海默病的主要触发因素，APP的胞吞作用需要Aβ42代（辜和Squazzo，1994; Grbovic等人，2003; Cirrito等人，2008;拉金德伦等人，2008）内吞作用后，APP可以循环回到质膜上，可能会逃避内体的处理虽然许多研究表征了APP内吞作用，但需要建立调节。 APP回收的机制。因此，强有力的，敏感的和定量的测定是必要的。已经通过免疫荧光和定量地使用表面蛋白的批量生物素化，随后追逐内吞作用和剥离或阻断表面蛋白后的循环追踪，定性地评估APP回收（辜等，1996; Yamazaki，1996; Chaufty等，2012）。
我们使用经典的免疫荧光和半定量的细胞生物学方法，开发了用于跟踪和测量具有Neuro2a细胞中的APP回收的方法。我们的测定依赖于用红色荧光蛋白（RFP）标记的APP的瞬时表达，以检测和定量APP的细胞库和使用针对APP胞外域的抗体来选择性检测和定量表面池的运输的APP。 ...
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| Open-book Preparations from Chick Embryos and DiI Labeling of Commissural Axons
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Author:
Date:
2014-07-05
[Abstract] Successful neural circuit formation relies on the accurate navigation of axons towards their targets during development. Axons are guided by a combination of short-range and long-range, attractive and repulsive cues. The commissural axons of the developing spinal cord have provided an informative in vivo model for the identification of multiple axon guidance molecules and mechanisms. These axons extend ventrally from the dorsal spinal cord and cross the midline at the floor plate, before making a sharp rostral turn towards the head. This simple trajectory has facilitated the ...
[摘要] 成功的神经电路形成依赖于在发展期间轴突朝向其靶标的精确导航。轴突由短程和长程，吸引和排斥线索的组合引导。发育中的脊髓的连合轴突提供了用于多轴突导向分子和机制的鉴定的信息的体内模型。这些轴突从背侧脊髓向腹侧延伸并在底板处穿过中线，然后朝向头部进行尖锐的嘴唇转向。这个简单的轨迹有助于许多轴突指导分子的识别，因为可以容易地识别作为遗传操作的结果的定型指导决定的干扰。开放书测定是评估脊柱连合轴突的轨迹的方法。脊髓被解剖出来，在屋顶板上打开并固定平。亲脂性荧光染料DiI的点状注射用于在显微镜和分析之前追踪连合轴突轨迹。
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