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Author:
Date:
2012-03-20
[Abstract] This protocol describes the basic principle of PCR/restriction digest genotyping of point mutations in worms, based on the principle of Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) analysis. This type of genotyping is, particularly, useful when phenotypic analysis of animals carrying point mutations is difficult (e.g., in a complex genetic background).
I will illustrate the general procedures, using an example of daf-2 gene, encoding the sole insulin/IGF-1 receptor of C. elegans. Gems et al.(1998) did a very elegant job and characterized a series of ...
[摘要] 本试验方法介绍了线虫点突变的PCR /限制性内切酶消化基因型鉴定基本原理，基于限制性片段长度多态性（RFLP）分析的原则。这种类型的基因型鉴定对于特别适用于当携带点突变动物的表型分析困难时（例如，在一个复杂的遗传背景中）。
我将以编码线虫（C. elegans）唯一insulin/IGF-1受体的daf-2基因为例，举例说明一般程序I。 Gems等做了非常出色的线虫研究工作，描述了一系列daf-2的突变 ，包括以下两个温度敏感的减效等位基因 (Gems, Sutton et al. 1998):
daf-2(e1370):替换 C/T (野生型/突变体), 氨基酸的改变：错义P为S
侧翼序列: 5’-ctctatgaaatggttacactcggtgctcag catatattggtttgagtaatgatgaggtgt
胞内激酶域, I级，强表型
daf-2(e1368): 替换 C/T (野生型/突变体), 氨基酸的改变：错义S为L
侧翼序列: 5’-tccggaatttacgacgtattgaggcaaagt actgttcagaaatctatatgctatcacagt
胞外配体结合域，II类，弱表型.
在这里，我将告诉你如何设计PCR - RFLP分析的引物。 ...
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