| Macrophage Survival Assay Using High Content Microscopy
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Macrophages maintain tissue homoeostasis by regulating inflammation and tissue repair mechanisms. Thus, the fate of macrophages has an impact on the state of the tissue. The aim of this protocol is to quantify macrophage survival using high content microscopy and image processing software. Here, we describe a high-content image based protocol to assess the effect of diverse stimuli in combination with pharmacological treatments on macrophage survival in a quantitative, unbiased and high-throughput manner.
[摘要] 巨噬细胞通过调节炎症和组织修复机制来维持组织均匀平衡。 因此，巨噬细胞的命运对组织的状态有影响。 该方案的目的是使用高含量显微镜和图像处理软件来量化巨噬细胞存活。 在这里，我们描述了一种基于高含量图像的方案，以定量，无偏差和高通量方式评估不同刺激与药理学治疗对巨噬细胞存活的影响。
【背景】巨噬细胞是吞噬先天免疫细胞，是组织炎症的主要驱动因素（Medzhitov，2008）。 这些细胞与自身免疫，自身炎症，感染性，神经变性和代谢性疾病一起与癌症相关（Ginhoux和Jung，2014）。 在这种情况下，巨噬细胞在炎症中的作用得到了很好的研究，然而，非传染性和感染性疾病中巨噬细胞存活的影响在很大程度上是未知的。 我们的研究表明，某些病原体相关受体（PRR）的激活可以诱导巨噬细胞存活（Eren等，2016）。 我们描述了一种分子机制，证明专门的细胞内病原体如何利用PRR诱导的细胞存活（Eren等，2016）。 因此，需要进一步的研究来了解巨噬细胞存活在不同疾病环境中的作用。
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| Measurement of Energy-dependent Rhodamine 6G Efflux in Yeast Species
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Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] Rhodamine 6G is a highly fluorescent dye often used to determine the transport activity of yeast membrane efflux pumps. The ATP-binding cassette transporter KlPdr5p confers resistance to several unrelated drugs in Kluyveromyces lactis. KlPdr5p also extrudes rhodamine 6G (R6G) from intact yeast cells in an energy-dependent manner. Incubation of yeast cells in the presence of 2-deoxy-D-glucose (inhibitor of glycolysis) and R6G (mitochondrial ATPase inhibitor) leads to marked depletion of intracellular ATP pool (Kolaczkowski et al., 1996). An active KlPdr5p ...
[摘要] 罗丹明6G是一种高荧光染料，常用于测定酵母膜外排泵的运输活性。 ATP结合盒转运蛋白Klr5p赋予乳酸克鲁维酵酵菌中几种不相关药物的抗性。 Pdr5p还以能量依赖的方式从完整的酵母细胞中挤出罗丹明6G（R6G）。 在2-脱氧-D-葡萄糖（糖酵解抑制剂）和R6G（线粒体ATP酶抑制剂）存在下酵母细胞的孵育导致细胞内ATP池的显着消耗（Kolaczkowski等人，1996）。 从完整的酵母细胞中可以直接测量R6G的荧光的直接测量PdF5p介导的来自完整酵母细胞的R6G的挤出。
【背景】多药物外排泵广泛分布，可在所有生物种类中找到。它们代表抗菌素耐药性的重要机制。量化外排泵活性的能力对于理解其对生理过程的贡献和评估潜在治疗药物（例如，外排抑制剂）的有效性（Blair和Piddock，2016）是必要的。外排活动测量的方法主要依赖于两种不同的机制。一些方法直接测量底物流出，即，多少基质被泵出，其他方法测量细胞内的底物分子积累，其水平然后用于间接推断流出。然而，后者由于可改变膜渗透性而改变了染料流入速率（Blair和Piddock，2016）的敏感性较差。 R6G在生长中的积累。白念珠菌细胞与ABC转运蛋白念珠菌药物抗性1（CDR1 ...
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| Rapid Preparation of Unsheathed Bacterial Flagella
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Author:
Date:
2015-03-20
[Abstract] The flagellum is required for bacterial swimming and swarming motility. In the biphasic Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. Typhimurium), the flagellar filament is build up by two distinct monomeric subunits, flagellin FliC and FljB. S. Typhimurium has the ability to switch between two flagellins, FliC and FljB, in a phase-variable manner. The switch to FliC is called phase H1 and considered important for bacterial growth and survival in the spleen in a murine infection model of typhoid fever. Flagellin is secreted as monomeric subunits, but the majority of ...
[摘要] 鞭毛是细菌游泳和群居运动所需的。在双相沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌（Typhimurium）（Typhimurium）中，鞭毛丝由两种不同的单体亚单位鞭毛蛋白FliC和FljB组成。 Typhimurium具有以相变方式在两个鞭毛蛋白FliC和FljB之间切换的能力。切换到FliC被称为H1期，并且被认为对于鼠伤寒热的鼠感染模型中的脾的细菌生长和存活是重要的。鞭毛蛋白作为单体亚基分泌，但是大多数鞭毛蛋白在分泌时作为鞭毛丝聚合。沙门氏菌鞭毛蛋白通常通过包括多步离心和酸处理的方法分离。在这里，我们描述了用于制备沙门氏菌鞭毛蛋白的简化方案以用于分析目的，以在没有抗体的帮助下确定鞭毛蛋白的量。所用的生长条件是固定相，对数期和模拟胃肠道的低氧和高盐条件。可以分析其他来源生物体的鞭毛蛋白表达，例如沙门氏菌和大肠杆菌的其他血清型，包括鞭毛相或遗传变异体。鞭毛蛋白表达分析补充鞭毛相关表型分析，如游泳和蜂群行为。
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