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Date:
2018-10-05
[Abstract] In this protocol, we describe the production and purification of the ectodomain of the E2661 envelope protein (amino acids 384-661) of the Hepatitis C virus, which plays a fundamental role in the entry of the virus into the host cell. This protein has been expressed in both prokaryotic and eukaryotic systems but in small quantities or without native protein characteristics. In our case, we use the Baculovirus expression system in insect cells. E2661 is secreted into the extracellular medium and purified by means of affinity chromatography a Ni-NTA-column because the ...
[摘要] 在该协议中，我们描述了丙型肝炎病毒的E2 661 包膜蛋白（氨基酸384-661）的胞外域的产生和纯化，其在病毒进入中起基础作用。 进入宿主细胞。 该蛋白质已经在原核和真核系统中表达，但是少量或没有天然蛋白质特征。 在我们的例子中，我们在昆虫细胞中使用杆状病毒表达系统。 E2 661 被分泌到细胞外培养基中并通过亲和层析Ni-NTA-柱纯化，因为该蛋白质在其氨基末端具有六个组氨酸的标签。 纯化的蛋白质具有天然样构象，并且大量生产，每升约5-6mg。
【背景】丙型肝炎病毒（HCV）是全世界慢性肝炎，肝硬化和肝细胞癌的主要原因（Major et al。，2001; Alter，2006）。此时，没有HCV疫苗，抗病毒药物用于治疗HCV感染（Imran et al。，2014）。然而，治疗费用昂贵且不是100％有效（Kohli et al。，2014）。 HCV包膜糖蛋白E2负责与细胞受体的相互作用，因此它是研究病毒感染周期的第一步的主要候选者。由于糖基化和聚集，先前的表达系统产生低水平的异质蛋白质，并且难以区分经历生产性和非生产性折叠的分子（Flint ...
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Date:
2015-06-05
[Abstract] Despite its extensive use as a nitrogen fertilizer, the role of urea as a directly accessible nitrogen source for crop plants is still poorly understood. So far, the physiological and molecular aspects of urea acquisition have been investigated only in a few plant species highlighting the importance of a urea transporter in roots, DUR3 (Kojima et al., 2007; Wang et al., 2012; Zanin et al., 2014a). Regarding maize plants, a crop that needs a large amount of urea fertilizer, the capability to take up urea via an inducible and high-affinity transport system has been ...
[摘要] 尽管其作为氮肥的广泛使用，但是作为直接可及的作物植物氮源的脲的作用仍然知之甚少。 迄今为止，仅在少数植物物种中研究了尿素获取的生理学和分子学方面，突出了根中的尿素转运蛋白DUR3的重要性（Kojima等人，2007; et al。，2012; Zanin et al。，2014a）。 关于玉米植物，需要大量尿素肥料的作物，通过诱导型和高亲和力转运系统摄取尿素的能力最近已被表征（Zanin等人，2014a; Zanin et al。，2014b）。 在这里，我们描述了一个小规模的协议，适合测量尿素净高亲和力摄取完好的玉米植物的根。
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