| zPACT: Tissue Clearing and Immunohistochemistry on Juvenile Zebrafish Brain
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] In studies of brain function, it is essential to understand the underlying neuro-architecture. Very young zebrafish larvae are widely used for neuroarchitecture studies, due to their size and natural transparency. However, this model system has several limitations, due to the immaturity, high rates of development and limited behavioral repertoire of the animals used.
We describe here a modified version of the passive clearing technique (PACT) (Chung et al., 2013; Tomer et al., 2014; Yang et al., 2014; Treweek et al., 2015), which facilitates ...
[摘要] 在脑功能研究中，了解潜在的神经结构是至关重要的。非常年轻的斑马鱼幼虫被广泛用于神经构造研究，由于它们的大小和自然透明度。然而，这个模型系统有一些局限性，由于使用的动物不成熟，发育率高，行为表现有限。
我们在这里描述了被动清除技术（PACT）的改进版本（Chung等人，2013; Tomer等人，2014; Yang等人， ，2014; Treweek et。，2015），这有助于大型水生物种标本的神经解剖学研究。这种方法最初是为斑马鱼（2017年）开发的（ Danio rerio ）（2017年;Frétaud等人，2017年; Mayrhofer等人，2017年; Xavier “）等人，2017），但也已经成功地在其他鱼类上进行了测试，如鲭鱼（Oryzias latipes ）（Dambroise et al。，2017 ），墨西哥洞穴鱼（ Astyanax mexicaus ）和非洲斑马鱼（metriaclima zebra ）以及其他水生物种，如非洲爪蟾属。 （非洲爪蟾热带非洲爪蟾）（Fini等人，2017）。该协议基于由Deisseroth实验室等开发和修改的CLARITY方法（Chung等人，2013; Tomer等人，2014; Yang等人，2014），适用于水生物种，特别是斑马鱼（zPACT）。
该协议旨在通过在聚丙烯酰胺/甲醛网状物中交联来保持组织的整体结构，使斑马鱼标本光学透明。然后通过SDS处理除去存在于样品中的大部分脂质，通过消除导致不透明的水/脂质界面处的光散射来均化样品的折射率。最后的清除步骤包括将样品在基于果糖的固定介质（衍生自SeeDB）（Ke等人，2013）中孵育，其折射率与物镜的折射率相匹配的显微镜。该技术与使用绿色荧光蛋白（GFP）在特定细胞群体中表达的转基因斑马鱼的组合提供了描述其他技术不可见的解剖细节的机会。 ...
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| Highly Accurate Real-time Measurement of Rapid Hydrogen-peroxide Dynamics in Fungi
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Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] Reactive oxygen species (ROS) are unavoidable by-products of aerobic metabolism. Despite beneficial aspects as a signaling molecule, ROS are principally recognized as harmful agents that act on nucleic acids, proteins and lipids. Reactive oxygen species, and, in particular, hydrogen peroxide (H2O2), are deployed as defense molecules across kingdoms, e.g., by plants in order to defeat invading pathogens like fungi. Necrotrophic plant pathogenic fungi themselves secrete H2O2 to induce host cell death and facilitate infection. Hydrogen ...
[摘要] 活性氧（ROS）是有氧代谢的副产物。尽管作为信号分子的有利方面，ROS主要被认为是作用于核酸，蛋白质和脂质的有害物质。反应性氧物质，特别是过氧化氢（H 2 O 2 O 2），作为防御分子跨越诸如，通过植物为了击败入侵病原体如真菌。营养不良的植物致病真菌本身分泌H 2 O 2 O 2以诱导宿主细胞死亡并促进感染。过氧化氢在一定程度上可以通过膜自由扩散。为了能够监测真菌中的细胞内过氧化氢动力学，我们最近在丝状植物病原体禾谷镰刀菌（Mentges and Bormann，2015）中建立了多功能的HyPer成像技术。 HyPer由插入到原核H 2 O 2 O 2 - 感觉蛋白OxyR的调节结构域（RD）中的循环置换的黄色荧光蛋白（cpYFP）组成。 OxyR域使传感器高度特异于H 2 O 2 O 2。 HyPer的氧化增加了在488nm激发的cpYFP的荧光，并降低了在405nm激发的荧光，从而促进了比例式读数（Belousov等人，2006）。 HyPer原来是对pH敏感。 HyPer的H 2 O 2 O 2 - 感官域中的单个氨基酸突变使传感器对H 2 O 2不敏感。该记者称为SypHer，作为pH变化的对照。
＆nbsp; ＆nbsp;通过使用HyPer成像技术，我们可以证明：i）HyPer成像能够特异和准确地检测细胞内H 2 O 2 O 2平衡的快速变化，ii）。 ...
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| Hydrogen Peroxide Measurement in Arabidopsis Root Tissue Using Amplex Red
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Author:
Date:
2016-11-05
[Abstract] This protocol describes the measurement of hydrogen peroxide (H2O2) content in Arabidopsis root tissue by using the Amplex® Red Hydrogen Peroxide/Peroxidase Assay Kit. When root tissue is disrupted and resuspended in phosphate buffer, H2O2 is released from the cells. The obtained root extracts containing H2O2 can be mixed with a solution containing Amplex® Red reagent (10-acetyl-3,7-dihydrophenoxazine). In the presence of horseradish peroxidase, the Amplex® Red reagent reacts with H2 ...
[摘要] 该方案描述了在拟南芥根组织中通过使用Amplex来测量过氧化氢（H 2 O 2 O 2）含量。 sup>红色过氧化氢/过氧化物酶测定试剂盒。当根组织被破坏并重新悬浮在磷酸盐缓冲液中时，H 2 O 2 O 2从细胞中释放。可以将获得的含有H 2 O 2 O 2的根提取物与含有Amplex Red试剂（10-乙酰基-3,7-二 - 。在辣根过氧化物酶的存在下，Amplex Red试剂与H 2 O 2以1:1的化学计量反应。所得产物是红色荧光化合物试卤灵，其可以通过荧光测定或分光光度法检测。我们的方案是基于Amplex ®红色过氧化氢/过氧化物酶测定试剂盒的手册，并描述了一步一步的程序，详细描述必要的控制和数据分析。我们还包括旨在帮助用户容易地用其自己的样品再现测定的方案，说明和实施例的修改。
[背景] 活性氧（ROS），例如H 2 O 2 O 2可以在该细胞是发育提示或应激条件的结果。在大量，ROS积累可能是有害的，通过造成细胞损伤。然而，增加的ROS产生也可以具有信号传导作用，并且作为控制下游细胞反应的第二信使。在植物中，对于许多非生物胁迫，例如干旱，盐度，温度胁迫和营养缺乏，已经显示ROS的信号传导作用（Mittler，2002; Mittler和Blumwald，2015; Xia等人）。 ，2015）。在我们最近的出版物Le ...
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