| Assessment of Diadenylate Cyclase and c-di-AMP-phosphodiesterase Activities Using Thin-layer and Ion Exchange Chromatography
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Author:
Date:
2021-01-05
[Abstract] All living cells use cyclic nucleotides as second messengers for signal sensing and transduction. Cyclic di-3′,5′-adenosine monophosphate (c-di-AMP) is primarily involved in the control of bacterial and euryarcheal osmoadaptation and is produced by diadenylate cyclases from two molecules of ATP. Specific phosphodiesterases hydrolyze c-di-AMP to the linear phosphoadenylate adenosine 5′-pApA or to AMP. Different methods including high-performance liquid chromatography (HPLC), thin-layer chromatography (TLC) and ion exchange chromatography (IEX) can be used to determine ...
[摘要] [摘要]所有活细胞均使用环状核苷酸作为第二信使，以进行信号传感和转导。环状二-3 ' ，5 ' -腺苷一磷酸（C-二-AMP）主要涉及细菌和控制euryarcheal osmoadaptation并且由产生diadenylate环化酶从ATP的两个分子。特定的磷酸二酯酶将c-di-AMP水解为线性磷酸腺苷腺苷5'-pApA或AMP。可以使用包括高效液相色谱（HPLC），薄层色谱（TLC）和离子交换色谱（IEX）在内的各种方法来确定c-di-AMP合成和降解酶的活性。在这里，我们详细描述了TLC和IEX方法适合于表征diadenylate环化酶DISA和磷酸二酯酶ATAC从链霉菌venezuelae 。TLC可以快速，轻松地分离放射性标记的底物和产品，而IEX避免了潜在危险的放射性底物的利用，如果没有HPLC系统，则可以用作良好的替代品。与TLC分析不同，无法使用IEX分析并行分析样品，因此更加耗时。
[背景]环核苷酸第二信使是原核和真核信号通路中的关键分子。环状二-3 ' ，5 ' -腺苷一磷酸（三二- AMP）是一种细菌第二信使与许多重要的功能，如渗压剂动态平衡调节，细胞壁代谢，生物膜的形成，DNA完整，孢子形成，毒力和生长（Fahmi et ...
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| Spot Assays for Viability Analysis of Cyanobacteria
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Author:
Date:
2015-09-05
[Abstract] Cyanobacteria are prokaryotic organisms performing oxygenic photosynthesis. The cyanobacterium Synechocystis sp. PCC 6803 is a model organism for the study of photosynthesis, gene regulation and biotechnological applications because it is easy to manipulate genetically. Moreover, this cyanobacterium can grow photoautotrophically as well as chemoheterotrophically in the dark utilizing glucose. Microbiologists often use optical density measured with a spectrophotometer for the comparison of growth performance of different strains in liquid cultures. Because Synechocystis ...
[摘要] 蓝细菌是进行含氧光合作用的原核生物。蓝细菌集胞藻 PCC 6803是一种用于光合作用，基因调控和生物技术应用研究的模式生物，因为它易于基因操作。此外，这种蓝细菌可以在黑暗中利用葡萄糖光化自养地以及化学异养生长。微生物学家经常使用用分光光度计测量的光密度用于比较液体培养物中不同菌株的生长性能。因为 Synechocystis PCC 6803（特别是运动株）倾向于在胁迫条件下形成聚集体，该方法可能不适合在不同生长条件下评估不同的菌株。此外，许多实验室不能很好地配备标准化的光生物反应器和照明设施，以确保生长曲线的可重复性。在这里，我们描述了高度可重复的斑点测定的蓝细菌菌株的生存力分析。
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