| Assessment of Cellular Redox State Using NAD(P)H Fluorescence Intensity and Lifetime
|
|
Author:
Date:
2017-01-20
[Abstract] NADH and NADPH are redox cofactors, primarily involved in catabolic and anabolic metabolic processes respectively. In addition, NADPH plays an important role in cellular antioxidant defence. In live cells and tissues, the intensity of their spectrally-identical autofluorescence, termed NAD(P)H, can be used to probe the mitochondrial redox state, while their distinct enzyme-binding characteristics can be used to separate their relative contributions to the total NAD(P)H intensity using fluorescence lifetime imaging microscopy (FLIM). These protocols allow differences in metabolism to be ...
[摘要] NADH和NADPH分别是分解代谢和合成代谢过程的氧化还原辅因子。此外，NADPH在细胞抗氧化防御中起着重要作用。在活细胞和组织中，其光谱相同的自发荧光（称为NAD（P）H）的强度可用于探测线粒体氧化还原状态，而其不同的酶结合特征可用于将其相对贡献与总共分离使用荧光寿命成像显微镜（FLIM）的NAD（P）H强度。这些方案允许在细胞类型和改变的生理和病理状态之间检测代谢的差异。
背景 氧化还原辅因子烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）及其磷酸化对应物NADPH的还原形式本质上是荧光的，两者都吸收波长为340（±30）nm并在460（±50）nm处发射的光（Patterson等人。，2000）。这些光谱特征在氧化成NAD（上标+）或NADP（superson），（2007））时损失。单独的NAD和NADP池的氧化还原平衡决定了对比的代谢过程（Ying，2008），如图1所示。NAD作为电子受体，用于通过三羧酸氧化线粒体中的糖，脂质和氨基酸底物（TCA）循环，并作为内线粒体膜（IMM）上的电子传递链（ETC）的电子供体，促使将质子泵送到膜间隙中，作为合成三磷酸腺苷（ATP）的电源，通过F 1 F 0 O 3 ATP合成酶（Osellame等人，2012）。因此，线粒体中NADH与NAD + 的平衡反映了TCA循环与ETC活性的平衡。 ...
|
|
|
| Rat Aortic Ring Model to Assay Angiogenesis ex vivo
|
|
Author:
Date:
2015-10-20
[Abstract] Angiogenesis is a multifactorial event which requires the migration, proliferation, differentiation and structure rearrangement of endothelial cells. This angiogenic process has been commonly studied using in vitro assays such as Boyden chamber assay, wound healing assay and tube formation assay. These assays mainly use monolayers of endothelial cells which are modified by repeated passages and are fully proliferative, a situation far away from physiology. In addition, not only endothelial cells are involved in this process but surrounding cells (such as pericytes, smooth muscle ...
[摘要] 血管生成是一种多因素事件，需要内皮细胞的迁移，增殖，分化和结构重排。这种血管生成过程已经使用体外试验例如Boyden腔室试验，伤口愈合试验和管形成试验进行了普遍研究。这些测定主要使用通过重复传代修饰的内皮细胞的单层，并且是完全增殖的，远离生理学的情况。此外，不仅内皮细胞参与这个过程，而且周围细胞（例如周细胞，平滑肌细胞，成纤维细胞）和支持基质也是主要的玩家。
三维主动脉环模型概括了血管生成的复杂性并结合了体外和体内模型的优点。主动脉环在化学上确定的培养环境中培养。在该系统中生长的微血管是具有周围支持细胞的管腔血管，并且与在体内血管生成期间形成的微血管基本上不可区分。可以在不存在血清分子的情况下测定促血管生成因子或抗血管生成因子的功效，否则血清分子可能干扰待测试的物质（Nicosia和Ottinetti，1990）。然而，该系统需要获得新鲜的大鼠组织，但是可以从一个主动脉制备几个样品。
|
|
|