| Functional ex-vivo Imaging of Arterial Cellular Recruitment and Lipid Extravasation
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] The main purpose of this sophisticated and highly versatile method is to visualize and quantify structural vessel wall properties, cellular recruitment, and lipid/dextran extravasation under physiological conditions in living arteries. This will be of interest for a broad range of researchers within the field of inflammation, hypertension, atherosclerosis, and even the pharmaceutical industry. Currently, many researchers are using in vitro techniques to evaluate cellular recruitment, like transwell or flow chamber systems with cultured cells, with unclear physiological comparability. ...
[摘要] 这种复杂和多功能方法的主要目的是在活体动物的生理条件下可视化和量化结构血管壁性质，细胞募集和脂质/葡聚糖外渗。这对于广泛的炎症，高血压，动脉粥样硬化甚至制药行业的研究人员都是有兴趣的。目前，许多研究人员正在使用体外技术来评估细胞募集，如具有培养细胞的transwell或流动室系统，具有不清楚的生理学可比性。这里介绍的方法详细描述了使用复杂而灵活的方法来研究在动脉血流条件下体外新鲜和活的鼠颈动脉中的动脉壁特性和白细胞募集。该模型模拟体内情况，并允许使用从两个不同供体分离的细胞和动脉（例如，野生型与特异性敲除）组合成一个实验，从而提供关于白细胞和/或内皮细胞特性的信息两个捐助者。因此，该模型可以被认为是复杂和侵入性体内研究的替代方案，例如对比实验。
【背景】该方法的核心是应用双光子激光扫描显微镜（TPLSM）来显示安装在动脉造影腔室中的体外颈动脉，其已显示模拟体内情况下存在的生理条件（Megens et al。，2007）。新鲜的动脉，在我们这种情况下是小鼠颈动脉，但该方法也适用于其他类似大小的血管（包括人类血管）（Bloksgaard等，2015），仔细提取并安装在使用细线的两个玻璃微量移液管的动脉造影室。该腔室应提供足够的空间以用显微镜物镜（优选为具有> ...
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| Electroretinogram (ERG) Recordings from Drosophila
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Author:
Date:
2015-11-05
[Abstract] Phototransduction is a process in which light is converted into electrical signals used by the central nervous system. Invertebrate phototransduction is a process mediated by the phosphoinositide signaling cascade, characterized by Phospholipase C (PLC) as the effector enzyme and the Transient Receptor Potential (TRP) channels as its target. The great advantage of using invertebrate photoreceptors is the simplicity of the preparation, the ease of light stimulation, the robust expression of key molecular components, and most importantly, the ability to apply the power of molecular genetics. ...
[摘要] 光转导是将光转化为中枢神经系统使用的电信号的过程。无脊椎动物光转导是由磷酸肌醇信号级联介导的过程，其特征在于磷脂酶C（PLC）作为效应酶和瞬时受体电位（TRP）通道作为其靶标。使用无脊椎动物光感受器的巨大优势是制备的简单性，光刺激的容易性，关键分子组分的强大表达，最重要的是应用分子遗传学功能的能力。这最后一个特征主要归因于果蝇Melanogaster作为首选的动物模型。
视网膜电图（ERG）是从整个眼睛进行的细胞外电压记录，其反映了由于光刺激而引起的视网膜的总电活动。果蝇ERG光响应是稳健和容易获得的，因此使其成为识别由于突变导致的光反应缺陷的方便方法。延长的去极化后电位（PDA）是一种有用的ERG现象，可以在强烈的蓝光下从白眼苍蝇记录。由于光响应终止的失败，由于色素视紫红质的大量光转化引起的称为元视紫质的暗稳定状态。不同于轻度重合的ERG记录，其在光刺激停止后迅速下降到暗基线，在光偏移之后，PDA响应持续很长时间（小时）。然而，通过应用强烈的橙色光刺激，通过将视紫红质素转换回视紫红质，可以随时将该反应抑制到黑暗的基线（参见图7; Minke，2012）。 PDA已被用作筛选视觉缺陷突变体的重要工具（Minke，2012）。
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| MIFE Technique-based Screening for Mesophyll K+ Retention for Crop Breeding for Salinity Tolerance
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Author:
Date:
2015-05-05
[Abstract] Potassium is known as a rate-limiting factor for crop yield and plays an important role in plants response under abiotic stresses. Recently, cytosolic K+ retention ability in leaf mesophyll has emerged as an important component of plant salt tolerance mechanism (Wu et al., 2013; Wu et al., 2014; Wu et al., 2015). In this protocol, the procedure for screening leaf mesophyll for K+ retention by the MIFE (microelectrode ion flux estimation) technique is described in detail using wheat as an example. By measuring NaCl-induced K+ efflux ...
[摘要] 钾被称为作物产量的限速因子，并且在植物在非生物胁迫下的应答中起重要作用。近来，叶肉叶中的细胞质K sup +保留能力已经成为植物盐耐受机制的重要组成部分（Wu等人，2013; Wu等人， ，2014; Wu et al。，2015）。在该方案中，使用小麦作为实例详细描述了通过MIFE（微电极离子通量估计）技术筛选叶子叶肉用于K sup +保留的程序。通过测量叶片叶肉中NaCl诱导的K + sup/+流出，可以根据其盐度胁迫耐受性筛选和分类大量植物种质。该方法提供了快速和可靠的工具，其靶向直接有助于耐盐性性状的特定膜转运蛋白的活性，并且因此，相对于传统的全植物表型具有竞争优势。虽然本议定书的焦点是小麦，但是可以采用所建议的方法来筛选任何其它作物品种的叶子叶肉中的K sup +保留。
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