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Seahorse XF24 FluxPak containing XF24 sensor cartridges, XF24 cell culture microplates and XF Calibrant Solution

海马XF24 FluxPak
公司名称: Agilent Technologies
产品编号: 100850-001
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()
Determination of the Glycolysis and Lipogenesis in Culture of Hepatocytes
Author:
Date:
2016-11-05
[Abstract]  Metabolic flux analyses are needed to provide insights into metabolic regulation that occurs in cells. The current protocol describes fast and reproducible methods for determining glycolysis and de novo lipogenesis of hepatocytes. Primary culture of hepatocytes is an ‘in vitro’ model useful to study liver glucose and lipid metabolism (Denechaud et al., 2016). The protocol is divided in 2 parts. Part I: Glycolysis experiment is assessed using the Seahorse extracellular flux (XF) analyser. Glycolysis is determined via the measurement of the extracellular acidification ... [摘要]  需要代谢通量分析来提供细胞中发生的代谢调节的见解。目前的协议描述了确定糖酵解和肝细胞脂肪生成的快速和可重复的方法。肝细胞的原代培养是用于研究肝葡萄糖和脂质代谢的"体外"模型（Denechaud等人，2016）。协议分为2部分。第I部分：使用海马细胞外通量（XF）分析仪评估糖酵解实验。糖酵解通过测量培养基的细胞外酸化速率（ECAR）来确定，所述培养基主要来自丙酮酸中葡萄糖转化后乳酸的细胞排泄。第II部分：新生脂肪生成实验测定来自乙酸盐C 14+前体的甘油三酯（TG）中的放射性C 14+掺入。在2小时后，向培养基中补加乙酸盐，提取脂质，并在新合成的TG标记的定量之前通过TLC（薄层色谱）分离。

[背景] 有不同的方法来评估葡萄糖和脂质代谢：代谢物定量，酶活性和代谢组学...我们的协议聚焦于活细胞的代谢通量分析并且不需要代谢组学设施。海马细胞外通量（XF）分析仪，现在存在于很多机构，是通过确定培养基pH值间接测量活细胞间接糖酵解的强大工具。脂肪生成协议不需要大投资，是高度可重复的。也可以使用氚化水确定，其通过脂肪酸合酶引入新鲜合成的脂质中。

Assessment of Brown Adipocyte Thermogenic Function by High-throughput Respirometry
Author:
Date:
2015-11-05
[Abstract]  Brown adipose tissue (BAT) has the unique ability to dramatically increase mitochondrial uncoupled fuel oxidation for thermogenesis in response to adrenergic stimulation. A key parameter in assessing brown adipocyte thermogenic capacity is mitochondrial uncoupling as determined by respiration. Measuring mitochondrial oxygen consumption rate (OCR) therefore provides valuable information to study the regulation and dysregulation of fuel metabolism and energy expenditure. Adding measurements of mitochondrial membrane potential allows for more in-depth interpretation of the respirometry data. ... [摘要]  棕色脂肪组织（BAT）具有显着增加线粒体解偶联燃料氧化以响应肾上腺素刺激的热生成的独特能力。评估棕色脂肪细胞产热能力的关键参数是通过呼吸确定的线粒体解偶联。因此，测量线粒体氧消耗率（OCR）为研究燃料代谢和能量消耗的调节和失调提供了有价值的信息。添加线粒体膜电位的测量允许更加深入地解释呼吸数据。在这里我们提供使用Seahorse XF分析仪测量贴壁完整和质膜透性棕色脂肪细胞呼吸的协议。在方案部分I中，去甲肾上腺素和游离脂肪酸的组合用于诱导解偶联呼吸。然后使用ATP合酶抑制剂寡霉素，化学去偶联剂FCCP和复合物III抑制剂抗霉素A分别测量偶联的，最大的和非线粒体的氧消耗。在方案第II部分中，质膜用重组perfringolysin O透化，胆固醇依赖性细胞溶解素寡聚化成在质膜中专门的孔。这允许代谢物可用性的实验性控制，而不从天然细胞环境中分离线粒体。

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